海南方格星虫纤溶酶分离纯化及部分基因克隆

采用硫酸铵盐析、DEAE-Sepharose FF离子交换、Sephadex G-50凝胶层析等方法从方格星虫(Sipunculus nudus)内脏组织中分离纯化出一种水解纤维蛋白的活性酶,命名为SNF1。经SDS-PAGE及native-PAGE分析其分子量为约24~26 k D的单链蛋白。MALDI-TOF MS分析分子质量为842.414 6的肽段与NCBI报道的方格星虫纤溶酶(gb|AEA06599.1|)肽段匹配。根据该纤溶酶cds基因序列设计引物,通过RT-PCR法扩增基因,并连接p MD19-T载体转化大肠杆菌E.coli DH5α感受态细胞。克隆转化子测序得到273 bp的纤溶酶基因序列,与该报道方格星虫纤溶酶基因序列相似度96%。本研究为此方格星虫纤溶酶c DNA全长序列的克隆及在原核或真核生物中表达的深入研究提供基础。