抗EGFRvⅢ单链抗体的原核表达条件的优化及纯化 |
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引用本文: | 杨友辉,刘香香,吴琼,刘亭,何彬,李勇军,兰燕宇.抗EGFRvⅢ单链抗体的原核表达条件的优化及纯化[J].基因组学与应用生物学,2018(7). |
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作者姓名: | 杨友辉 刘香香 吴琼 刘亭 何彬 李勇军 兰燕宇 |
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作者单位: | 贵州医科大学药学院贵州省药物制剂重点实验室民族药与中药开发应用教育部工程研究中心 |
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摘 要: | 为了构建抗EGFRvⅢ单链抗体大肠杆菌表达体系,优化抗EGFRvⅢ单链抗体在大肠杆菌中的表达条件,并建立纯化方法。构建抗EGFRvⅢ单链抗体的pET-22b(+)重组质粒,将其转化到大肠杆菌BL21中,研究不同温度、不同浓度诱导剂对目的蛋白表达效率的影响。用Ni2+亲和层析纯化蛋白,并通过免疫印迹对其进行鉴定。抗EGFRvⅢ单链抗体重组质粒经NdeⅠ和XhoⅠ双酶切,菌落PCR和测序验证,结果显示重组质粒构建成功。SDS-PAGE结果表明BL21表达的目的蛋白相对分子量为29kD左右,与理论分子量一致,免疫印迹结果表明在29kD左右出现一条特异性条带,与SDS-PAGE结果一致。15℃和0.6μmol/L的诱导剂为抗EGFRvⅢ单链抗体的最佳诱导条件。本研究成功构建了抗EGFRvⅢ单链抗体大肠杆菌表达体系,并获得了大肠杆菌表达单链抗体的最佳诱导条件。
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