抗猪PD-L1单克隆抗体的制备与其生物学特性鉴定

本研究旨在制备抗猪PD-L1单克隆抗体(monoclonal antibody,m Ab),有助于阻断猪PD-1/PD-L1通路逆转免疫功能。免疫原为猪PD-L1胞外区重组蛋白,雌性BALB/c鼠为免疫动物,用淋巴细胞杂交瘤技术将鼠骨髓瘤细胞NS0和免疫BALB/c鼠脾细胞融合,ELISA法筛选及多次克隆化培养,筛选抗猪PD-L1 mAb的杂交瘤细胞株。成功制备1株能稳定分泌抗猪PD-L1的mAb的杂交瘤细胞株3B5,Ig亚型为IgG1,细胞上清和腹水效价分别为1:1×2~(10)和1:1.024×10~5,ELISA和Western-blotting结果表明该株单抗能特异性识别猪重组PD-L1蛋白,流式细胞术结果表明该单抗可以与猪PBMC上PD-L1蛋白有效结合,成功制备了1株分泌抗猪PD-L1单克隆抗体的杂交瘤细胞株3B5,为检测猪PD-L1蛋白表达水平及猪PD-1通路在猪传染性疾病中的致病机制提供有力的检测工具。