| 利用CRISPRi挖掘大肠杆菌生物合成D-泛酸的关键基因 |
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| 引用本文： | 张博,杨玉凤,贺周霖,章誉琼,柳志强,郑裕国.利用CRISPRi挖掘大肠杆菌生物合成D-泛酸的关键基因[J].微生物学报,2023,63(12):4625-4643. |
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| 作者姓名： | 张博 杨玉凤 贺周霖 章誉琼 柳志强 郑裕国 |
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| 作者单位： | 浙江工业大学手性生物制造国家地方联合工程研究中心, 浙江 杭州 310014;浙江工业大学生物工程学院 浙江省生物有机合成技术研究重点实验室, 浙江 杭州 310014;华东合成生物学产业技术研究院, 浙江 杭州 310014 |
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| 基金项目： | 国家重点研发计划(2018YFA0901400)；国家自然科学基金(32070099， 31971342) |
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| 摘 要： | 【目的】D-泛酸(D-pantothenic acid,DPA)是一种重要的功能化合物，被广泛应用于医疗保健、化妆品、动物食品和饲料等领域，具有良好的市场前景及应用。本研究以实验室保藏的大肠杆菌菌株DPAP10为底盘菌株，利用CRISPR干扰(clustered regularly interspaced palindromic repeats interference,CRISPRi)技术，筛选影响工程菌株DPA生物合成的内源性基因靶点。【方法】构建了p Target和pd Cas9的双质粒CRISPRi系统，可以实现对基因单个或组合表达抑制，摇瓶发酵检测基因抑制对DPA合成的影响；通过实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RT-q PCR)检测了基因抑制后的转录水平；通过高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)检测了中间代谢物分析代谢通路变化。【结果】成功从126个靶基因中筛选得到5个显著影响DPA合成的关键...
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| 关 键 词： | 代谢工程 大肠杆菌 D-泛酸 CRISPRi |
| 收稿时间： | 2023/4/17 0:00:00 |
Mining key genes for biosynthesis of D-pantothenic acid in Escherichia coli by CRISPRi |
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| ZHANG Bo,YANG Yufeng,HE Zhoulin,ZHANG Yuqiong,LIU Zhiqiang,ZHENG Yuguo.Mining key genes for biosynthesis of D-pantothenic acid in Escherichia coli by CRISPRi[J].Acta Microbiologica Sinica,2023,63(12):4625-4643. |
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| Authors: | ZHANG Bo YANG Yufeng HE Zhoulin ZHANG Yuqiong LIU Zhiqiang ZHENG Yuguo |
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| Institution: | The National and Local Joint Engineering Research Center for Biomanufacturing of Chiral Chemicals, Zhejiang University of Technology, Hangzhou 310014, Zhejiang, China;Key Laboratory of Bioorganic Synthesis of Zhejiang Province, College of Biotechnology and Bioengineering, Zhejiang University of Technology, Hangzhou 310014, Zhejiang, China;Huadong Industrial Technology Research Institute of Synthetic Biology, Hangzhou 310014, Zhejiang, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | metabolic engineering Escherichia coli D-pantothenic acid CRISPRi |
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