大肠杆菌His_6融合表达载体及其表达产物的一步纯化

构建了Ｔ７启动子控制下的融合表达载体，使外源蛋白以Ｎ端与６个连续的组氨酸残基（Ｈｉｓ６）融合的形式表达。这些载体含有强Ｔ７启动子、终止子、翻译起始区、多克隆位点以及噬菌体ｆ１复制起始区，使外源基因不仅可以得到高效表达而且可以利用ｈｅｌｐｅｒｐｈａｇｅ包装单链ＤＮＡ，从而不需亚克隆就可以直接进行测序及点突变。在多数情况下，表达产物均得到可溶性表达。Ｈｉｓ，融合表达产物可经金属离子（Ｎｉ２＋）配体亲和层析一步纯化，纯化既可在天然状态下进行，也可以在变性状态下进行。利用上述融合表达载体高效活性表达了Ｈｉｓ，融合的小鼠ｃＡＭＰ依赖的蛋白激酶催化亚基，并经金属离子（Ｎｉ２＋）配体亲和层析一步分离纯化得到均一蛋白。