| 重组人白介素-12在银纹夜蛾中的表达纯化及其生物活性 |
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| 引用本文： | 徐进平,孟小林,王健,鲁伟.重组人白介素-12在银纹夜蛾中的表达纯化及其生物活性[J].中国病毒学,2002,17(4):340-343. |
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| 作者姓名： | 徐进平 孟小林 王健 鲁伟 |
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| 作者单位： | 武汉大学病毒研究所,湖北武汉,430072 |
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| 基金项目： | 湖北省重点资助项目(2001AA304B05). |
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| 摘 要： | KB细胞经PDBu刺激,采用异硫氰酸胍一步法提取细胞总RNA,RT-PCR法获得重组人白介素-12(rhIL-12) P35和P40 cDNA.将hIL-12 P35 cDNA和P40 cDNA分别克隆到pAcUW51载体的Polyhedrin和P10启动子下游,构建pAcUW51-IL12转移载体.pAcUW51-IL12与坏死缺陷型线性苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒基因DNA共转染Sf9细胞,获得重组杆状病毒Ac-hIL12.该病毒经血腔感染银纹夜蛾幼虫,采用亲和层析法纯化rhIL-12;SDS-PAGE(银染法)、Western blot鉴定表达和纯化的产物;ELISA检测rhIL-12含量;MTT法检测rhIL-12样品生物活性.rhIL-12分子量为75kD.rhIL-12在Sf9细胞培养中表达水平为17.8μg/106细胞;在银纹夜蛾幼虫中表达水平为200-300mg/L血淋巴.纯化的重组rhIL-12样品对经PHA-P激活的PBMC有明显的增殖活性,且具有明显的促NK细胞杀伤活性的生物活性.
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| 关 键 词： | 人白介素-12 表达 纯化 生物活性 银纹夜蛾 |
| 文章编号： | 1003-5125(2002)04-0340-04 |
| 修稿时间： | 2001年4月24日 |
Expression, Purification and Bioactivity Detection of Recombinant Human IL-12 in Argyogramma agnata |
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