| 定点突变提高苯丙氨酸羟化酶的热稳定性 |
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| 引用本文： | 叶双双,周丽,周哲敏. 定点突变提高苯丙氨酸羟化酶的热稳定性[J]. 生物工程学报, 2016, 32(9): 1243-1254 |
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| 作者姓名： | 叶双双 周丽 周哲敏 |
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| 作者单位： | 江南大学 生物工程学院，江苏 无锡 214122,江南大学 生物工程学院，江苏 无锡 214122,江南大学 生物工程学院，江苏 无锡 214122 |
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| 基金项目： | 国家高技术研究发展计划 (863计划) (No. 2014AA021304)，江苏高校优势学科建设工程自主项目，111引智计划 (No. 111-2-06)，江苏省现代发酵工业协同创新中心，2014年基本科研-重点项目子项目 (No. JUSRP51411B) 资助。 |
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| 摘 要： | 嗜热菌中,蛋白质存在Ala替换Gly以及Arg替换Lys的趋势。为了提高紫色色杆菌来源的苯丙氨酸羟化酶的热稳定性,将该酶中所有Gly突变成Ala,Lys突变成Arg,筛选获得热稳定性提高的突变体,并进行组合突变,对突变酶的酶学性质进行研究。结果表明,突变酶K94R和G221A在50℃的半衰期分别为26.2 min、16.8 min,比原始酶(9.0 min)分别提高了1.9倍、0.9倍,同时组合突变酶K94R/G221A在50℃处理1 h后仍保留65.6%的酶活,比原始酶(8.6%)高出6.6倍。圆二色谱结果显示原始酶和突变酶K94R、G221A及K94R/G221A的T_m值分别为51.5℃、53.8℃、53.1℃和54.8℃。蛋白三维结构模拟推测突变体热稳定性提高机理为:突变体K94R中Arg94与Ile95之间形成额外氢键,稳定其所在的柔性区域;突变体G221A中Ala221与Leu281产生疏水作用,稳定酶分子C-端柔性区。该研究结果为蛋白质热稳定性改造提供了参考,也为苯丙氨酸羟化酶在功能性食品领域的应用奠定了基础。
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| 关 键 词： | 苯丙氨酸羟化酶，热稳定性，定点突变，丙氨酸突变，精氨酸突变 |
| 收稿时间： | 2016-01-12 |
Thermal stability improvement for phenylalanine hydroxylase by site-directed mutagenesis |
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| Shuangshuang Ye,Li Zhou and Zhemin Zhou. Thermal stability improvement for phenylalanine hydroxylase by site-directed mutagenesis[J]. Chinese journal of biotechnology, 2016, 32(9): 1243-1254 |
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| Authors: | Shuangshuang Ye Li Zhou Zhemin Zhou |
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| Affiliation: | School of Biotechnology, Jiangnan University, Wuxi 214122, Jiangsu, China,School of Biotechnology, Jiangnan University, Wuxi 214122, Jiangsu, China and School of Biotechnology, Jiangnan University, Wuxi 214122, Jiangsu, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | phenylalanine hydroxylase thermal stability site-directed mutagenesis alanine mutation arginine mutation |
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