| 人SM22α在巴斯德毕赤酵母中的表达、纯化及抗体制备 |
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| 作者姓名： | Wen JK Nie L Li JY Cheng YH Han M |
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| 作者单位： | 河北医科大学基础医学研究所,河北省医学生物技术重点实验室,河北,石家庄,050017 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金;河北省自然科学基金 |
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| 摘 要： | 目的：用酵母表达重组人平滑肌22α（SM22α）蛋白,制备兔抗人SM22α多克隆抗体。方法：利用PCR从pGEM3z—SM22α质粒扩增得到人SM22α基因编码区,重组至pPIC9构建酵母表达载体,转染巴斯德毕赤酵母,进行分泌型表达。表达产物经分步盐析和CM-纤维素柱层析纯化后,免疫家兔,制备兔抗人sM22α多克隆抗体。结果：所构建的pPIC9-SM22α酵母表达载体转染酵母感受态细胞后,外源性SM22α可整合至酵母染色体中,经甲醇诱导84h,可实现SM22α的高效表达与分泌。用70％硫酸铵处理上清液,收集沉淀进行离子交换层析纯化后,经变性的聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）可见一分子量为22kD的单一区带。用该纯化产物免疫家兔制备的兔抗人SM22α抗血清可用于检测人或大鼠血管壁中SM22α的表达水平。结论：重组人SM22α可在巴斯德毕赤酵母中进行高效表达与分泌,纯化蛋白可用于抗体制备,为研究SM22α功能提供了检测工具。
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| 关 键 词： | 平滑肌22α 巴斯德毕赤酵母 分泌表达 抗血清 |
| 文章编号： | 1000-6834（2006）03-0379-05 |
| 收稿时间： | 2004-06-21 |
| 修稿时间： | 2005-12-16 |
Expression, purification and antibody preparation of recombinant human SM22alpha |
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| Wen JK,Nie L,Li JY,Cheng YH,Han M.Expression, purification and antibody preparation of recombinant human SM22alpha[J].Chinese Journal of Applied Physiology,2006,22(3):379-383. |
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| Authors: | Wen Jin-kun Nie Lei Li Jing-yi Cheng Yun-hui Han Mei |
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| Institution: | Key Laboratory for Medical Bioteehnology of Hebei Province, Institute of Basle Medical Sciences, Hebei Medical University, Shijiazhuang 050017, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | smooth muscle 22 alpha Pichia pastoris expression antibody vascular walls |
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