基于CRISPR/Cas9系统建立SNX11基因敲除A549细胞系

为了建立SNX11基因稳定敲除A549细胞系，本研究通过构建针对人SNX11基因的特异性打靶慢病毒载体，将该慢病毒感染A549细胞系，使用嘌呤霉素对慢病毒感染阳性的A549细胞进行筛选，利用梯度稀释法获得单细胞并扩增培养，提取细胞基因组DNA,PCR扩增后进行测序验证，同时提取细胞蛋白后利用Western Blot方法进行蛋白敲除验证，最后进行细胞活性检测和脱靶效应评估。最后，本研究获得了一株SNX11基因敲除A549细胞系；通过脱靶效应评估，结果显示最可能的20个脱靶位点均不存在脱靶现象；该基因敲除对细胞增殖活性没有影响。本研究成功构建了一株SNX11基因敲除A549细胞系，为SNX11蛋白的功能研究建立了细胞模型。