蚯蚓纤溶酶新基因EfP-0的电子克隆及其编码区序列RT-PCR验证

利用生物信息学手段，以期获得蚯蚓纤溶酶F-Ⅰ-0组分的基因。根据从粉正蚓（Lumbricus rubellus）中分离的FⅠ0组分的N端氨基酸序列VVGGSDTTIGQYPHQL，利用DNAMAN软件通过电子克隆方法，从Lumbricidae 的dbEST中获得该组分的核酸序列信息，设计特异引物， 经过RT-PCR，成功地从赤子爱胜蚓（Eisenia foetida）中克隆到一条蚯蚓纤溶酶新基因，命名为EfP-0。EfP-0基因全长678bp, 编码225个氨基酸的成熟肽，属丝氨酸蛋白酶，胰蛋白酶家族，与F-Ⅰ-0组分的氨基酸组成非常接近。BLAST证明，EfP-0与已报道的蚯蚓纤溶酶基因之间的相似性均低于40％，因此为蚯蚓纤溶酶中的一个新基因，GenBank 登录号为DQ836917。构建的pMAL-c2x-EfP-0重组质粒，在大肠杆菌TB1中获得融合蛋白MBP-EfP-0的可溶性表达，表达产物有酪蛋白平板溶解活性。