| 太平洋牡蛎防御素在毕赤酵母中的重组表达及其抑菌活性 |
| |
| 引用本文： | 崔旭,陶妍,王强厚,张亚莉,颜倩倩.太平洋牡蛎防御素在毕赤酵母中的重组表达及其抑菌活性[J].生物工程学报,2019,35(1):91-101. |
| |
| 作者姓名： | 崔旭 陶妍 王强厚 张亚莉 颜倩倩 |
| |
| 作者单位： | 上海海洋大学 食品学院 上海水产品加工及贮藏工程技术研究中心，上海 201306,上海海洋大学 食品学院 上海水产品加工及贮藏工程技术研究中心，上海 201306,上海海洋大学 食品学院 上海水产品加工及贮藏工程技术研究中心，上海 201306,上海海洋大学 食品学院 上海水产品加工及贮藏工程技术研究中心，上海 201306,上海海洋大学 食品学院 上海水产品加工及贮藏工程技术研究中心，上海 201306 |
| |
| 基金项目： | 上海市科委工程中心能力提升项目 (No. 16DZ2280300) 资助。 |
| |
| 摘 要： | 防御素是一类富含精氨酸和半胱氨酸的内源性阳离子抗菌肽,是软体动物抵御各种病原微生物侵染的重要免疫因子。太平洋牡蛎防御素(Crassostrea gigas defensin,CgD)近羧基端的43个氨基酸残基构成了其成熟肽区域,决定了CgD的生物学活性。首先通过逆转录PCR和设计特异性引物从太平洋牡蛎外套膜中分离并扩增到3?端添加和不添加6×His标签的两种目的基因CgDH~+和CgDH–;与pPICZαA连接后构建的重组表达载体(pPICZαA-CgDH~+和pPICZαA-CgDH–)电转至毕赤酵母Pichia pastoris X-33中,使用1.0%甲醇诱导表达目的蛋白CgDH~+和CgDH–,最适培养条件为29℃、250 r/min、72 h;通过固化金属离子亲和层析(IMAC)获得分子量为5.78 kDa的纯化的重组蛋白CgDH~+,根据其蛋白质浓度推算表达量为2.32 mg/L。经MALDI-TOF-TOF质谱分析证明纯化产物即为预期的目的蛋白。抑菌试验结果显示分别含重组蛋白CgDH~+和重组蛋白CgDH–的培养液上清对金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus和铜绿假单孢菌Pseudomonas aeruginosa都具有抑菌活性,表明重组蛋白中6×His标签的存在与否并不影响其生物学活性。
|
| 关 键 词： | 太平洋牡蛎，防御素，毕赤酵母，重组表达，抑菌活性 |
| 收稿时间： | 2018/3/30 0:00:00 |
Recombinant expression of Crassostrea gigas defensin in Pichia pastoris and its antibacterial activity |
| |
| Xu Cui,Yan Tao,Qianghou Wang,Yali Zhang and Qianqian Yan.Recombinant expression of Crassostrea gigas defensin in Pichia pastoris and its antibacterial activity[J].Chinese Journal of Biotechnology,2019,35(1):91-101. |
| |
| Authors: | Xu Cui Yan Tao Qianghou Wang Yali Zhang and Qianqian Yan |
| |
| Institution: | Shanghai Engineering Research Center of Aquatic-Product Processing & Preservation, College of Food Science and Technology, Shanghai Ocean University, Shanghai 201306, China,Shanghai Engineering Research Center of Aquatic-Product Processing & Preservation, College of Food Science and Technology, Shanghai Ocean University, Shanghai 201306, China,Shanghai Engineering Research Center of Aquatic-Product Processing & Preservation, College of Food Science and Technology, Shanghai Ocean University, Shanghai 201306, China,Shanghai Engineering Research Center of Aquatic-Product Processing & Preservation, College of Food Science and Technology, Shanghai Ocean University, Shanghai 201306, China and Shanghai Engineering Research Center of Aquatic-Product Processing & Preservation, College of Food Science and Technology, Shanghai Ocean University, Shanghai 201306, China |
| |
| Abstract: | |
| |
| Keywords: | Crassostrea gigas defensin Pichia pastoris recombinant expression antibacterial activity |
| 本文献已被 CNKI 等数据库收录！ |
| 点击此处可从《生物工程学报》浏览原始摘要信息 |
| 点击此处可从《生物工程学报》下载免费的PDF全文 |
|
