小鼠附睾分泌的防御素Defb48的原核表达及纯化 |
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作者姓名: | 陈立瑾 田利源 李秀丽 陈树林 汪莉 王玉民 |
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作者单位: | 1. 军事医学科学院,生物工程研究所,北京,100071;西北农林科技大学,动物医学院,陕西,杨凌,712100 2. 军事医学科学院,生物工程研究所,北京,100071 3. 西北农林科技大学,动物医学院,陕西,杨凌,712100 |
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基金项目: | 国家高技术研究发展计划,国家自然科学基金,国家科技重大新药创制专项 |
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摘 要: | 目的:获取小鼠附睾分泌的防御素Defb48的基因并原核表达、纯化,为研究其功能奠定基础。方法:提取小鼠附睾组织的总RNA,用RT-PCR技术扩增出不含信号肽的Defb48编码序列,将2段Defb48编码序列串联克隆至原核表达载体pET28(a)中,经酶切和测序鉴定正确的重组质粒转化大肠杆菌Rosetta(DE3),IPTG诱导表达重组蛋白;用镍柱进行重组蛋白的纯化,然后进行SDS-PAGE和Western印迹分析鉴定。结果:获得实验所需小鼠附睾分泌的防御素Defb48的基因序列,测序结果与已发表的基因序列一致;在大肠杆菌Rosetta(DE3)中表达了His-Defb48融合蛋白,经Western印迹分析,在相对分子质量18 000处有特异的蛋白条带,镍柱纯化后获得纯度较好的融合蛋白。结论:克隆了小鼠附睾分泌的防御素Defb48基因,并在大肠杆菌Rosetta(DE3)中表达纯化出融合蛋白,为制备其多克隆抗体,进而进一步研究Defb48的功能奠定了基础。
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关 键 词: | β-防御素 Defb48 原核表达 亲和纯化 |
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