α-2,6唾液酸转移酶(ST6Gal1)的cDNA克隆、原核表达及生物活性研究 |
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引用本文: | 侯小强,高玉伟,孙培录,冯娜,夏成柱,杨松涛,段德明.α-2,6唾液酸转移酶(ST6Gal1)的cDNA克隆、原核表达及生物活性研究[J].中国生物工程杂志,2009,29(1):17-22. |
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作者姓名: | 侯小强 高玉伟 孙培录 冯娜 夏成柱 杨松涛 段德明 |
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作者单位: | 吉林大学畜牧兽医学院 军事医学科学院军事兽医研究所 |
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基金项目: | 国家重点基础研究发展规划(973计划),国家科技支撑计划 |
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摘 要: | 从HepG2细胞中提取总RNA,经RT-PCR扩增α-2,6唾液酸转移酶基因,构建于pMD-18T克隆载体中,经序列测定后与GenBank中报道的已知序列比对完全一致,再将已知目的序列插入原核表达载体pET-28a(+)中。将构建正确的原核表达载体转化表达受体菌BL21(DE3)中,IPTG诱导其进行表达并鉴定目的蛋白,对鉴定正确的目的蛋白复性后经Ni2 +亲和层析柱纯化获得高纯度的α-2,6唾液酸转移酶蛋白。然后用霍乱弧菌神经氨酸酶处理健康鸡红细胞,清除鸡红细胞表面所有类型的唾液酸寡糖链;再用表达的α-2,6唾液酸转移酶以 CMP-唾液酸作为底物在霍乱弧菌神经氨酸酶处理的鸡红细胞表面标记上SAα2,6 Gal受体。将标记有SAα2,6Gal受体的鸡红细胞应用微量血凝试验和流式细胞仪进行检测,以验证所表达蛋白的生物活性。结果表明,原核表达的α-2,6唾液酸转移酶具有较好的生物活性。
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关 键 词: | α-2 6唾液酸转移酶 原核表达 生物特性 |
收稿时间: | 2008-05-27 |
修稿时间: | 2008-10-30 |
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