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| 利用启动子缺陷型打靶载体敲除五指山小型猪GGTA1基因 | |
| 引用本文： | 郑道山,冯冲,朱彦宾,龙川,冯书堂,潘登科,马文丽.利用启动子缺陷型打靶载体敲除五指山小型猪GGTA1基因[J].生物技术通讯,2011,22(4):458-462. |
| 作者姓名： | 郑道山 冯冲 朱彦宾 龙川 冯书堂 潘登科 马文丽 |
| 作者单位： | 1. 南方医科大学基因工程研究所,广东,广州,510515;中国农业科学院北京畜牧兽医研究所,北京,100193 2. 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所,北京,100193 3. 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所,北京,100193;甘肃农业大学动物科学技术学院,甘肃,兰州,730070 4. 南方医科大学基因工程研究所,广东,广州,510515 |
| 基金项目： | 中央级公益性科研院所基本科研业务费专项，国家重大专项 |
| 摘 要： | 目的:获得α-1,3-半乳糖基转移酶(GGTA1)基因敲除的五指山小型猪胎儿,为异种器官移植研究提供基础平台。方法:以新霉素磷酸转移酶基因(neo)为筛选标记基因构建启动子缺陷型打靶载体,打靶载体线性化后用电转染法将其导入胎儿成纤维细胞中,转染后的细胞经G418筛选后,用PCR法检测药物抗性的细胞克隆,对阳性细胞进行核移植构建重构胚胎及胚胎移植。结果:转染后,经筛选共得到176个具有G418抗性的细胞克隆,经PCR检测,其中2个细胞克隆发生了同源重组;以其中1个GGTA1+/-细胞克隆为供体细胞进行核移植,将重构胚移植到2头自然发情的受体母猪中,1头受体妊娠;第37 d将代孕母猪处死,获得2个胎儿,经PCR和Southern印迹鉴定,均为GGTA1单等位基因敲除胎儿。结论:构建了五指山小型猪GGTA1基因部分外显子4区域敲除的启动子缺陷型打靶载体,获得了GGTA1单等位基因敲除的胎儿,为培育GGTA1基因敲除的五指山小型猪奠定了基础。 |
| 关 键 词： | 五指山小型猪 基因敲除 GGTA1基因 胎儿成纤维细胞 |
Knockout of GGTA1 Gene by Promoter-Trap Strategy in Wuzhishan Miniature Pig |
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| ZHENG Dao-Shan,FENG Chong,ZHU Yan-Bin,LONG Chuan,FENG Shu-Tang,PAN Deng-Ke,MA Wen-Li.Knockout of GGTA1 Gene by Promoter-Trap Strategy in Wuzhishan Miniature Pig[J].Letters in Biotechnology,2011,22(4):458-462. | |
| Authors: | ZHENG Dao-Shan FENG Chong ZHU Yan-Bin LONG Chuan FENG Shu-Tang PAN Deng-Ke MA Wen-Li |
| Institution: | ZHENG Dao-Shan1,2,FENG Chong2,ZHU Yan-Bin2,3,LONG Chuan2,FENG Shu-Tang2,PAN Deng-Ke2,MA Wen-Li1 1.Institute of Genetic Engineering,Southern Medical University,Guangzhou 510515,2.Institute of Animal Sciences,Chinese Academy of Agricultural Sciences,Beijing 100193,3.College of Animal Science and Technology,Gansu Agricultural University,Lanzhou 730070,China |
| Abstract: | Objective: To disrupt GGTA1 gene in Wuzhishan miniature pig fetus and develop a basic platform for xenotransplantation research.Methods: The promoterless gene knockout vector which contained neo positive selection marker was generated.The construct was linearized and electroporated into the porcine fetal fibroblasts cells.The drug resistant cell clones were screened by PCR after G418 selection.Reconstructed embryos established with positive cells were transferred into surrogate sows.Results: G418 resistant ... |
| Keywords: | Wuzhishan miniature pig gene knockout GGTA1 fetal fibroblasts |
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