人肿瘤坏死因子及其突变体的基因工程下游工艺研究

研究了重组人肿瘤坏死因子(rhTNFα)及其突变体Lys²]-人肿瘤坏死因子Lys²]-rhTNFα)的基因工程下游工艺。rhTNFα和Lys²]-rbTNFα的温控表达工程菌株在B-BTaunE 10型15L自控罐中经发酵每升可得50g湿菌体。rhTNFα和Lys²]-rhTNFα的表达水平仍能保持在50％以上，且表达产物为可溶性蛋白。所得菌体经超声破菌、硫酸铵沉淀，然后依次用DEAE—Sepharose FF、CM-Sepharose FF和Sephacryl S-200柱层析进行分离纯化，由每升发酵液菌体最终可得1g左右的纯品，纯度达到98％左右，rhTNFα的比活为～1.5×10⁸IU／mg，Lys²]－rhTNα的比活为～6×10⁸IU／mg。