受体型酪氨酸激酶PDGFRβ在毕赤酵母中的表达与纯化

构建了受体酪氨酸激酶 PDGFRβ 的融合表达载体 pPIC3.5K-PDGFRβ, 转化毕赤酵母GS115, 通过组氨酸营养缺陷型筛选, G4l8 高拷贝菌株筛选, 以及摇瓶诱导表达筛选, 得到一株高表达 PDGFRβ 毕赤酵母菌株 M3。对该菌株进行5 L罐培养, 镍柱亲和纯化在 250 mmol/L 咪唑浓度下洗下 PDGFRβ 融合蛋白, Western blot验证约为90.08 kD, 酶联免疫反应检测表明融合表达的PDGFRβ 具有高的酪氨酸激酶活性。为筛选其小分子抑制剂奠定了基础。