| 电穿孔法转化齐整小核菌 |
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| 引用本文： | 潘小红,刘佳宁,罗锋,常鹏. 电穿孔法转化齐整小核菌[J]. 微生物学报, 2023, 63(4): 1681-1689 |
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| 作者姓名： | 潘小红 刘佳宁 罗锋 常鹏 |
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| 作者单位： | 西南大学资源环境学院, 重庆 400715;能源生物资源开发重庆市重点实验室, 重庆 400715 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金(32100092);重庆市自然科学基金(cstc2021jcyj-msxmX0392) |
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| 摘 要： | 【目的】建立齐整小核菌(Sclerotium rolfsii)的电穿孔法转化方案,以实现经济、快速地遗传转化。【方法】将齐整小核菌gpd基因启动子控制的basta抗性基因bar与红色荧光蛋白基因DsRed Max组成的融合蛋白表达盒,通过电击转入野生型齐整小核菌细胞中,筛选转化子并进行PCR与荧光观察验证。在此基础上,测试了不同电压、脉冲时间、外源DNA片段与受体细胞比例等条件下的转化效率,以得到优化的电转化参数。最后,采用优化的条件,尝试转化多种抗性基因与荧光蛋白融合表达盒以测试其可用性。【结果】成功得到了bar、sdhR与aphI基因的转化子。【结论】成功建立了优化的齐整小核菌电穿孔转化法。优化的参数条件为电压2kV/cm、脉冲时间1 ms、DNA/匀浆细胞比例3μg/300 mg,电击1次。
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| 关 键 词： | 齐整小核菌 丝状真菌 电穿孔法 转化 |
| 收稿时间： | 2022-09-12 |
| 修稿时间： | 2022-11-27 |
Electroporation-mediated transformation of Sclerotium rolfsii |
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| PAN Xiaohong,LIU Jianing,LUO Feng,CHANG Peng. Electroporation-mediated transformation of Sclerotium rolfsii[J]. Acta microbiologica Sinica, 2023, 63(4): 1681-1689 |
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| Authors: | PAN Xiaohong LIU Jianing LUO Feng CHANG Peng |
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| Affiliation: | College of Resources and Environment, Southwest University, Chongqing 400715, China;Chongqing Key Laboratory of Bio-Resource Development for Bioenergy, Chongqing 400715, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Sclerotium rolfsii filamentous fungi electroporation transformation |
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