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| 金针菇谷氨酸脱氢酶基因的克隆及原核表达 | |
| 引用本文： | 李磊,杨远柱,刘泓,杜长青,林建中,朱咏华,刘选明.金针菇谷氨酸脱氢酶基因的克隆及原核表达[J].生命科学研究,2013,17(3):230-237. |
| 作者姓名： | 李磊 杨远柱 刘泓 杜长青 林建中 朱咏华 刘选明 |
| 作者单位： | 1. 湖南大学生物学院,中国湖南长沙,410082 2. 湖南亚华种业科学研究院,中国湖南长沙,410001 3. 福建农林大学资源与环境学院,中国福建福州,350002 |
| 基金项目： | 国家转基因生物新品种培育重大专项项目，国家自然科学基金面上项目，湖南省自然科学基金资助项目，植物分子遗传国家重点实验室开放课题和中央高校基本科研业务费湖南大学重大前期培育项目和青年教师科技创新扶持项目资助 |
| 摘 要： | 利用简并引物和RT-PCR方法从金针菇(Flammulina velutipes)幼嫩子实体中克隆获得FvGDH全长cDNA序列.构建入门载体pGWC-FvGDH,利用Gateway克隆技术的LR反应构建原核重组表达载体pDESTl7-FvGDH,转化大肠杆菌BL21(DE3).通过IPTG法诱导表达融合蛋白并进行表达条件优化.SDS-PAGE蛋白电泳分析表明,融合蛋白相对分子质量约为53 kD,与预测的一致.最佳表达条件为温度30℃、IPTG浓度0.4mmol/L、诱导4 h.融合蛋白表达量较高,实现了FvGDH的高效表达,并利用Western blotting对其特异性进行鉴定.FvGDH基因高效原核表达体系的成功建立,为进一步研究FvGDH的酶促动力学奠定了基础. |
| 关 键 词： | FvGDH Gateway克隆 原核表达 SDS-PAGE Western blotting |
Cloning of a Glutamate Dehydrogenase Gene from Flammulina velutipes and Prokaryotic Expression |
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| LI Lei , YANG Yuan-zhu , LIU Hong , DU Chang-qing , LIN Jian-zhong , ZHU Yong-hua , LIU Xuan-ming.Cloning of a Glutamate Dehydrogenase Gene from Flammulina velutipes and Prokaryotic Expression[J].Life Science Research,2013,17(3):230-237. | |
| Authors: | LI Lei YANG Yuan-zhu LIU Hong DU Chang-qing LIN Jian-zhong ZHU Yong-hua LIU Xuan-ming |
| Institution: | 1(1.College of Biological Sciences,Hunan University,Changsha 410082,Hunan,China;2.Academy of Seed Industry of Hunan Yahua,Changsha 410001,Hunan,China;3.College of Resources and Environment,Fujian Agriculture and Forestry University,Fujian 350002,Fuzhou,China) |
| Abstract: | |
| Keywords: | FvGDH Gateway clone prokaryotic expression SDS-PAGE Western blotting |
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