| 一种适用于双向电泳分析的高效真菌线粒体提取及蛋白质制样方法 |
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| 引用本文： | 密克,王金子,纪水养,陈琦,陈保善.一种适用于双向电泳分析的高效真菌线粒体提取及蛋白质制样方法[J].基因组学与应用生物学,2013(1):105-110. |
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| 作者姓名： | 密克 王金子 纪水养 陈琦 陈保善 |
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| 作者单位： | 广西大学生命科学与技术学院;亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目(31170137)资助 |
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| 摘 要： | 用液氮冷冻研磨法破碎真菌菌丝细胞,通过差速和蔗糖密度梯度离心分离纯化板栗疫病菌线粒体,所得线粒体产率(质量比)约为1/10~4。电子显微镜观察和蛋白印迹表明,所制备的线粒体完整性好,没有检测到其它细胞成分的污染。使用膜蛋白裂解液溶解线粒体制备蛋白样品,将蛋白样品200μg上样于pH3~10,24cm的非线性胶条进行等电聚焦,电聚焦后再进行第二向SDS-PAGE电泳分离,经银染获得重复性好、背景清晰、分辨率高(680±15个蛋白质点)的凝胶图谱。随机选择10个蛋白质点进行质谱分析,9个获得有效注释,均为线粒体特异性蛋白质,表明所制备的蛋白样品非常适合双向电泳分析及其后续的质谱鉴定。
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| 关 键 词： | 板栗疫病菌 线粒体 双向电泳 |
An Efficient Method of Isolation and Protein Preparation of Fungal Mitochondria for Two-dimentional Electophoresis |
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| Mi Ke,Wang Jinzi,Ji Shuiyang,Chen Qi,Chen Baoshan.An Efficient Method of Isolation and Protein Preparation of Fungal Mitochondria for Two-dimentional Electophoresis[J].Genomics and Applied Biology,2013(1):105-110. |
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| Authors: | Mi Ke Wang Jinzi Ji Shuiyang Chen Qi Chen Baoshan |
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| Institution: | 1,2* 1 College of Life Science and Technology, Guangxi University, Nanning, 530005; 2 State Key Laboratory for Conservation and Utilization of Subtropical Agro-bioresources, Nanning, 530005 |
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| Abstract: | |
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