| 产碱假单胞菌脂肪酶的克隆表达及酶学性质研究 |
| |
| 引用本文： | 孙苗苗,陈辉,吴坚平,杨立荣.产碱假单胞菌脂肪酶的克隆表达及酶学性质研究[J].微生物学通报,2012,39(11):1580-1588. |
| |
| 作者姓名： | 孙苗苗 陈辉 吴坚平 杨立荣 |
| |
| 作者单位： | 浙江大学 化学工程与生物工程学系 浙江 杭州 310027 |
| |
| 基金项目： | 国家自然科学基金项目(No. 20936022); 国家973计划项目(No. 2011CB710800); 国家863计划项目(No. 2011AA02A209) |
| |
| 摘 要： | 【目的】克隆产碱假单胞菌的脂肪酶基因,实现其在大肠杆菌中异源表达并进行酶学性质研究。【方法】通过基因文库构建和PCR,获得脂肪酶基因,并以pET30a(+)为表达载体、E.coli BL21(DE3)为宿主菌,在大肠杆菌中进行异源表达,表达产物经HisTrapTM亲和层析柱纯化后进行酶学性质研究。【结果】从产碱假单胞菌中克隆得到一个脂肪酶基因,大小为1 575 bp(GenBank登录号为JN674069)。该酶分子量为55 kD,最适底物为p-NPO,最适反应温度和pH分别为35°C、pH 9.0。重组酶经1 mmol/L的Cu2+处理30 min可使酶活提高至156%。在最适反应条件下重组酶的比活力为275 U/mg,Km和Vmax分别为80μmol/L和290 mmol/(min.g protein)。【结论】产碱假单胞菌脂肪酶基因的克隆与表达不仅积累了脂肪酶基因的资源,并为其在手性拆分中的应用奠定基础。
|
| 关 键 词： | 产碱假单胞菌 脂肪酶 克隆 表达 |
Cloning, expression and characterization of lipase from Pseudomonas alcaligenes |
| |
| SUN Miao-Miao,CHEN Hui,WU Jian-Ping and YANG Li-Rong.Cloning, expression and characterization of lipase from Pseudomonas alcaligenes[J].Microbiology,2012,39(11):1580-1588. |
| |
| Authors: | SUN Miao-Miao CHEN Hui WU Jian-Ping and YANG Li-Rong |
| |
| Institution: | Department of Chemical and Biological Engineering, Zhejiang University, Hangzhou, Zhejiang 310027, China |
| |
| Abstract: | |
| |
| Keywords: | Pseudomonas alcaligenes Lipase Cloning Expression |
| 本文献已被 CNKI 等数据库收录！ |
| 点击此处可从《微生物学通报》浏览原始摘要信息 |
| 点击此处可从《微生物学通报》下载免费的PDF全文 |
|
