鸽β-防御素5基因克隆及其抗菌活性 |
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引用本文: | 辛胜男,张可心,张名岳,韩宗玺,邵昱昊,刘晓丽,刘胜旺,马得莹.鸽β-防御素5基因克隆及其抗菌活性[J].生物工程学报,2012,28(11):1294-1305. |
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作者姓名: | 辛胜男 张可心 张名岳 韩宗玺 邵昱昊 刘晓丽 刘胜旺 马得莹 |
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作者单位: | 东北农业大学 动物营养研究所,黑龙江 哈尔滨 150030;中国农业科学院哈尔滨兽医研究所 兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室,黑龙江 哈尔滨 150001;东北农业大学 动物营养研究所,黑龙江 哈尔滨 150030;中国农业科学院哈尔滨兽医研究所 兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室,黑龙江 哈尔滨 150001;东北农业大学 动物营养研究所,黑龙江 哈尔滨 150030;中国农业科学院哈尔滨兽医研究所 兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室,黑龙江 哈尔滨 150001;中国农业科学院哈尔滨兽医研究所 兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室,黑龙江 哈尔滨 150001;中国农业科学院哈尔滨兽医研究所 兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室,黑龙江 哈尔滨 150001;中国农业科学院哈尔滨兽医研究所 兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室,黑龙江 哈尔滨 150001;中国农业科学院哈尔滨兽医研究所 兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室,黑龙江 哈尔滨 150001;东北农业大学 动物营养研究所,黑龙江 哈尔滨 150030 |
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基金项目: | 国家自然科学基金 (No. 30972110) 资助。 |
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摘 要: | 从鸽的骨髓和肝组织中扩增到2个禽β-防御素(AvBD)基因,在大肠杆菌中高效表达,检测其重组蛋白的抗菌活性。应用RT-PCR方法从鸽的骨髓和肝脏组织中扩增AvBD5基因,根据已发现的禽β-防御素和部分哺乳类动物β-防御素-5的氨基酸序列构建系统进化树,将该基因克隆到大肠杆菌原核表达载体pGEX-6p-1上进行原核表达,对该重组蛋白进行纯化,测定体外抗菌活性与理化特性。测序得到这2个基因的cDNA大小均为201 bp,编码66个氨基酸残基,内含6个位置保守的半胱氨酸残基。经遗传进化分析发现,该基因推导的两组氨基酸序列与鸭AvBD5的同源性最高,分别为87.9%和78.8%,这两组氨基酸序列的同源性为83.3%。因此,将其分别命名为鸽AvBD5α(骨髓)和鸽AvBD5β(肝脏)。进一步将这两个基因分别亚克隆到大肠杆菌pGEX-6p-1载体中进行原核表达。两个重组融合蛋白经纯化后,通过菌落计数法测定其体外抗菌活性,盐离子浓度对其抗菌活性的影响,及其融合蛋白的溶血活性。结果表明,重组鸽AvBD 5α、AvBD 5β融合蛋白的分子量约为32 kDa。具有明显的抗菌活性,对12种细菌均有不同程度的抑制作用,高盐浓度对其抗菌活性显著影响。此外,这两个重组蛋白对红细胞无显著溶血活性。
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关 键 词: | 鸽β-防御素5 重组蛋白 抗菌活性 |
收稿时间: | 2012/5/14 0:00:00 |
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