| 提高源自Bacillus circulans 251的β-CGTase对麦芽糖亲和性及其在生产海藻糖中的应用 * |
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| 引用本文： | 杜立,宿玲恰,吴敬. 提高源自Bacillus circulans 251的β-CGTase对麦芽糖亲和性及其在生产海藻糖中的应用 *[J]. 中国生物工程杂志, 2019, 39(5): 96-104. DOI: 10.13523/j.cb.20190511 |
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| 作者姓名： | 杜立 宿玲恰 吴敬 |
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| 作者单位： | 1 江南大学食品科学与技术国家重点实验室 无锡 2141222 江南大学生物工程学院 工业生物技术教育部重点实验室 无锡 2141223 江南大学教育部食品安全国际合作联合实验室 无锡 214122 |
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| 基金项目： | * 国家自然科学基金资助项目(31771916);国家自然科学基金资助项目(31425020) |
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| 摘 要： | 将B. circulans 251 β-CGTase应用于海藻糖制备,海藻糖转化率从50.4%提高至71.9%。为进一步提高底物的转化率,运用易错PCR-高通量筛选技术筛选对以麦芽糖为歧化反应受体的亲和性提高的B. circulans 251 β-CGTase突变体。利用低底物浓度的96孔板4,6-亚乙基-对硝基苯-α-D-麦芽七糖苷(EPS)显色法,最终筛选得到了一株对麦芽糖亲和性提高的突变体M234I。将野生型β-CGTase和突变体酶M234I进行蛋白质纯化,测定其酶学性质。结果表明,突变体的比活为345.25U/mg,野生型则为357.63U/mg;突变体M234I对麦芽糖的Km为0.258 2mmol/L,仅为野生型(0.474 9mmol/L)的54.4%,对麦芽糖的亲和性显著提高;突变体的最适温度、最适pH较野生型未发生较大变化。以麦芽糊精(DE值16)为底物,将突变体M234I用于多酶复配体系生产海藻糖,酶反应结果表明海藻糖的转化率最高达74.9%,较野生型β-CGTase提高约3%。
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| 关 键 词： | β-CGTase 易错PCR 分子改造 亲和性 海藻糖转化 |
| 收稿时间： | 2018-10-08 |
Enhancing Maltose Affinity of Bacillus circulans 251 β-CGTase and its Application in Trehalose Preparation |
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| Li DU,Ling-qia SU,Jing WU. Enhancing Maltose Affinity of Bacillus circulans 251 β-CGTase and its Application in Trehalose Preparation[J]. China Biotechnology, 2019, 39(5): 96-104. DOI: 10.13523/j.cb.20190511 |
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| Authors: | Li DU Ling-qia SU Jing WU |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | β-CGTase Error-prone PCR Molecular modification Affinity Trehalose conversion |
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