| 利用CRISPR/Cas9技术构建流感病毒高产细胞系MDCK-Tpl2-/- |
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| 引用本文： | 刘赛宝,李亚芳,王辉,王伟,冉多良,陈洪岩,孟庆文.利用CRISPR/Cas9技术构建流感病毒高产细胞系MDCK-Tpl2-/-[J].中国生物工程杂志,2019,39(1):46-54. |
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| 作者姓名： | 刘赛宝 李亚芳 王辉 王伟 冉多良 陈洪岩 孟庆文 |
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| 作者单位： | 1 新疆农业大学动物医学学院 乌鲁木齐 8300002 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所 兽医生物技术国家重点实验室 黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室 哈尔滨 150069 |
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| 基金项目： | * 兽医生物技术国家重点实验室自主课题(SKLVBP2017010);国家自然科学基金(30771615);“十二五”农村领域国家科技计划资助项目(2011AA100305) |
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| 摘 要： | Tpl2是调节I型(IFNα/β)和II型(IFNγ) IFN的关键调控因子,对病毒感染期间产生有效免疫应答至关重要。为了建立支持流感病毒高效繁殖的新型MDCK细胞系,利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建Tpl2基因敲除的MDCK细胞,绘制其细胞生长曲线;根据《中国药典》第三部,对细胞进行形态检查、内外源因子和致瘤性检测;流感病毒接种细胞(MOI=0. 1),测定12h、24h、48h、72h细胞培养上清的血凝滴度及72h TCID50滴度。结果:靶基因组测序结果显示,获得一株稳定敲除Tpl2的MDCK细胞(MDCK-Tpl2-/-);其与亲本细胞生长速率无显著差异,均为贴壁、上皮样细胞形态;细胞内细菌、真菌、支原体、病毒及致瘤性检测均为阴性;病毒接种后12h、24h、48h、72h,MDCK-Tpl2-/-细胞培养上清的血凝效价提高了1. 78～2. 5倍。病毒接种后72h,MDCK-Tpl2-/-细胞培养上清病毒的TCID50滴度提高了2. 8倍。结果表明,利用Tpl2缺陷型MDCK细胞系可以提高流感病毒产量,为提升疫苗质量奠定基础。
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| 关 键 词： | Tpl2 CRISPR/Cas9 MDCK-Tpl2^-/-细胞 细胞质控 禽流感病毒 |
| 收稿时间： | 2018-03-28 |
Construction of Influenza Virus High-producing Cell Line MDCK-Tpl2 -/- with CRISPR / Cas9 |
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| Sai-bao LIU,Ya-fang LI,Hui WANG,Wei WANG,Duo-liang RAN,Hong-yan CHEN,Qing-wen MENG.Construction of Influenza Virus High-producing Cell Line MDCK-Tpl2 -/- with CRISPR / Cas9[J].China Biotechnology,2019,39(1):46-54. |
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| Authors: | Sai-bao LIU Ya-fang LI Hui WANG Wei WANG Duo-liang RAN Hong-yan CHEN Qing-wen MENG |
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| Institution: | (College of Veterinary Medicine,Xinjiang Agricultural University,Urumqi 830000,China;State Key Laboratory of Veterinary Biotechnology,Heilongjiang Provincial Key Laboratory of Laboratory Animals and Comparative Medicine,Harbin Veterinary Research Institute of Chinese Academy of Agricultural Sciences,Harbin 150069,China) |
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| Abstract: | Sai-bao LIU;Ya-fang LI;Hui WANG;Wei WANG;Duo-liang RAN;Hong-yan CHEN;Qing-wen MENG(College of Veterinary Medicine,Xinjiang Agricultural University,Urumqi 830000,China;State Key Laboratory of Veterinary Biotechnology,Heilongjiang Provincial Key Laboratory of Laboratory Animals and Comparative Medicine,Harbin Veterinary Research Institute of Chinese Academy of Agricultural Sciences,Harbin 150069,China) |
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| Keywords: | Tpl2 CRISPR/Cas9 MDCK-Tpl2 -/- cell line Cell quality control Avian influenza virus |
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