| 从免疫及天然噬菌体抗体库中筛选抗rP27Kip1单链抗体的研究 |
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| 作者姓名： | 曹跃琼 乔守怡 袁有忠 黄建生 赵寿元 |
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| 作者单位： | 1. 复旦大学遗传学研究所,上海,200433
2. 第二军医大学长海医院血液科,上海,200433 |
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| 基金项目： | 国家"211"工程建设项目 |
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| 摘 要： | 用重组p27Kip1蛋白(rP27Kip1) 免疫小鼠,从免疫和未经免疫的小鼠脾脏抽提mRNA并扩增小鼠H链(H链)及L链(L链)基因,分别组装成单链可变区片段(ScFv)基因,构建噬菌体免疫抗体库及天然抗体库. 文库仅经一轮抗原-抗体亲和筛选后,用TaqⅠ/HinfⅠ酶切分析转化子. 获自免疫抗体库的64个克隆中,有11个克隆的酶切片段相同,而天然抗体库的64个克隆的片段则都彼此不同,但有1个克隆的酶切片段与免疫抗体库的11个克隆酶切片段相同. 将这些酶切图谱相同的重组片段分别克隆入原核表达载体pET28b(+),并在大肠杆菌(E. coli)中表达,表达产物经ELISA分析,证实可特异结合rP27Kip1抗原,一方面说明在抗体筛选过程中辅以酶切图谱分析,可以有效提高筛选效率,另一方面,也说明从噬菌体抗体库筛选特异性抗体是制备单克隆抗体(McAb)的理想途径之一.
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| 关 键 词： | 噬菌体抗体库 单链抗体 原核表达 |
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