| 培养山羊痘病毒常用细胞在X-gal环境中的显色差异分析* |
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| 引用本文： | 杨柳,牟豪,许国洋,白运川,余远迪.培养山羊痘病毒常用细胞在X-gal环境中的显色差异分析*[J].中国生物工程杂志,2021,41(9):48-54. |
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| 作者姓名： | 杨柳 牟豪 许国洋 白运川 余远迪 |
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| 作者单位： | 1 重庆市畜牧科学院 重庆 4024602 重庆市兽用生物制品工程技术研究中心 重庆 4024603 重庆酉阳土家族苗族自治县畜牧产业发展中心 重庆 409812 |
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| 基金项目： | * 重庆市技术创新与应用发展专项面上项目(cstc2019jscx-msxmX0325);农业部国家动物疫病长期性观测监测项目(18501) |
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| 摘 要： | 目的：为筛选出表达LacZ基因重组山羊痘病毒的适宜培养细胞系。方法：将常用于培养山羊痘病毒(GPV)的乳仓鼠肾细胞(BHK21)、羊肾细胞(SK)和羔羊睾丸细胞(LT)培养至单层,之后单层细胞用含X-gal的培养基继续培养,观察比较各细胞在X-gal环境中呈现的蓝色。提取单层细胞的RNA,进行LacZ基因的RT-PCR,回收PCR产物、连接载体、转化E.coli,挑阳性克隆测序分析。将单层细胞继续培养72 h,检测各细胞产生的β-半乳糖苷酶。结果：随着培养时间的延长,固体培养的BHK21、LT细胞孔中胶颜色变蓝且逐渐加深,显微镜观察可见细胞蓝斑,而SK细胞、空白、无X-gal孔中的胶未变色,镜检无细胞蓝斑;液体培养的单层细胞逐渐脱壁,培养液未见蓝色。RT-PCR产物电泳条带与预期分子量大小相符,测序结果显示目标DNA与LacZ基因序列相似性值达100%,表明3种细胞均有LacZ基因的转录本。β-半乳糖苷酶测定结果显示3种细胞均表达此酶,细胞产酶能力比较为BHK21>LT>SK,尤以SK细胞产β-半乳糖苷酶量极低。结论：显色差异法筛选出的羊肾细胞适宜培养表达LacZ基因的重组山羊痘病毒,结果可为山羊痘病毒新型疫苗研发提供一些参考。
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| 关 键 词： | LacZ基因 山羊痘病毒 显色差异法 羊肾细胞 |
| 收稿时间： | 2021-03-29 |
Analysis of the Difference in Color Development of Cultured Goatpox Virus Common Cells in X-gal Environment |
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| YANG Liu,MOU Hao,XU Guo-yang,BAI Yun-chuan,YU Yuan-di.Analysis of the Difference in Color Development of Cultured Goatpox Virus Common Cells in X-gal Environment[J].China Biotechnology,2021,41(9):48-54. |
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| Authors: | YANG Liu MOU Hao XU Guo-yang BAI Yun-chuan YU Yuan-di |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | LacZ gene Goatpox virus Color difference method SK cell |
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