| 特异腐质霉角质酶-OMP25融合蛋白在大肠杆菌中的高效表达 |
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| 引用本文： | 晏婷婷,刘展志,李光耀,吴敬.特异腐质霉角质酶-OMP25融合蛋白在大肠杆菌中的高效表达[J].微生物学报,2022,62(12):4918-4926. |
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| 作者姓名： | 晏婷婷 刘展志 李光耀 吴敬 |
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| 作者单位： | 江南大学食品科学与技术国家重点实验室, 江苏 无锡 214122;江南大学生物工程学院工业生物技术教育部重点实验室, 江苏 无锡 214122;江南大学教育部食品安全国际合作联合实验室, 江苏 无锡 214122 |
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| 基金项目： | 国家重点研发计划(2019YFA0706900)；江苏省科技厅政策引导类计划(国际科技合作/港澳台科技合作)—“一带一路”创新合作项目(BZ2020010) |
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| 摘 要： | 【目的】通过探究特异腐质霉角质酶-OMP25融合蛋白(HiC-OMP25)在不同大肠杆菌(Escherichia coli)菌株中的表达情况、底物降解情况、热稳定性及宿主菌细胞膜通透性与细胞表面疏水性，揭示表达HiC-OMP25时不同宿主菌的差异性，并进一步提高HiC-OMP25在大肠杆菌中的表达量。【方法】分别在E.coli BL21(DE3)及E.coli C43(DE3)中表达HiC-OMP25，并测定其对对硝基苯丁酸酯(4-nitrophenol butyrate，pNPB)、聚丙烯酸乙酯(polyethyl acrylate，PEA)的降解效果、50℃稳定性；测定表达HiC-OMP25时宿主菌的细胞膜通透性及细胞表面疏水性变化；共表达伴侣蛋白提高HiC-OMP25在E.coli C43(DE3)中的表达量。【结果】HiC-OMP25在E.coli BL21(DE3)与E.coli C43(DE3)中均成功表达并降解pNPB，但前者对PEA的降解效果及50 ℃稳定性均低于后者。同时，表达HiC-OMP25显著增强了E.coli BL21(DE3)的细胞膜通透性及细胞表面疏水性。HiC-OMP25与巯基氧化酶(Erv1p)、二硫键异构酶(DsbC)在E.coli C43(DE3)中共表达时，其表达量为原始菌株的2.14倍，且对pNPB及PEA均有良好的降解效果。【结论】异源表达时，HiC-OMP25在E.coli C43(DE3)中正确折叠，而在E.coli BL21(DE3)中未完全正确折叠；通过共表达伴侣蛋白提高了HiC-OMP25在E.coli C43(DE3)中的表达量，为以后HiC-OMP25的工业化生产及应用奠定了基础。
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| 关 键 词： | HiC-OMP25 Escherichia coli BL21(DE3) Escherichia coli C43(DE3) 细胞膜通透性 细胞表面疏水性 伴侣蛋白 |
| 收稿时间： | 2022/3/29 0:00:00 |
| 修稿时间： | 2022/5/6 0:00:00 |
High-efficiency expression of Humicola insolens cutinase-OMP25 fusion protein in Escherichia coli |
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| YAN Tingting,LIU Zhanzhi,LI Guangyao,WU Jing.High-efficiency expression of Humicola insolens cutinase-OMP25 fusion protein in Escherichia coli[J].Acta Microbiologica Sinica,2022,62(12):4918-4926. |
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| Authors: | YAN Tingting LIU Zhanzhi LI Guangyao WU Jing |
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| Institution: | State Key Laboratory of Food Science and Technology, Jiangnan University, Wuxi 214122, Jiangsu, China;Key Laboratory of Industrial Biotechnology, Ministry of Education, School of Biotechnology, Jiangnan University, Wuxi 214122, Jiangsu, China;International Joint Laboratory on Food Safety, Ministry of Education, Jiangnan University, Wuxi 214122, Jiangsu, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Humicola insolens cutinase-OMP25 fusion protein (HiC-OMP25) Escherichia coli BL21(DE3) Escherichia coli C43(DE3) cell membrane permeability cell surface hydrophobicity chaperone protein |
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