| pLNCX-pemt2重组载体的构建及pemt2基因在大鼠肝癌CBRH-7919细胞中的表达 |
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| 引用本文： | 邹伟,李春蕾,李兆育,李亚丽,马克里,夏泉,崔肇春. pLNCX-pemt2重组载体的构建及pemt2基因在大鼠肝癌CBRH-7919细胞中的表达[J]. 中国生物化学与分子生物学报, 2000, 16(5): 597-601 |
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| 作者姓名： | 邹伟 李春蕾 李兆育 李亚丽 马克里 夏泉 崔肇春 |
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| 作者单位： | 邹伟（辽宁师范大学生命科学学院，大连 116024） 李春蕾（大连医科大学生物化学和分子生物学教研室，大连 116027） 李兆育（大连医科大学生物化学和分子生物学教研室，大连 116027） 李亚丽（大连医科大学生物化学和分子生物学教研室，大连 116027） 马克里（大连医科大学生物化学和分子生物学教研室，大连 116027） 夏泉（大连医科大学生物化学和分子生物学教研室，大连 116027） |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目(39670809) |
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| 摘 要： | 为进一步研究 pemt2对肝癌细胞生长抑制的作用机制提供方便的实验模型 ,构建了p LNCX- pemt2重组体 .将目的基因 pemt2连接入含有 neo抗性基因的真核细胞表达载体 p LNCX中 ,构建 p LNCX- pemt2重组子 ,并用磷酸钙沉淀法将其转入大鼠肝癌 CBRH- 791 9细胞中 ,应用PCR、Western印迹及 [3 H]SAM参入等技术对其转染、表达及活性进行鉴定 .转染 p LNCX- pemt2的大鼠肝癌细胞 ,PEMT2成功表达 (分子量为 2 2 .5k D) ;高表达克隆 PEMT2的表达量比对照组高约 5倍 ,其活性比对照组高 2 .1倍 ;细胞生长的倍增时间从 2 1 .54± 7.0 8h延长到 43.2 2± 7.1 1h.结果表明 ,p LNCX- pemt2重组体转入肝癌细胞后 ,PEMT2蛋白得到高效表达 ,明显抑制肝癌细胞生长 .
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| 关 键 词： | 磷脂酰乙醇胺-N-甲基转移酶2 基因转染 基因表达 肝癌 |
| 收稿时间： | 2000-10-20 |
| 修稿时间： | 1999-10-29 |
Construction of pLNCX-pemt2 Vector and Expression of pemt2 Gene in Hepatoma CBRH-7919 Cells of Rats |
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| ZOU Wei ),LI Chun lei ),LI Zhao yu ),LI Ya li ),MA Ke li ),XIA Quan ),CUI Zhao chun ). Construction of pLNCX-pemt2 Vector and Expression of pemt2 Gene in Hepatoma CBRH-7919 Cells of Rats[J]. Chinese Journal of Biochemistry and Molecular Biology, 2000, 16(5): 597-601 |
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| Authors: | ZOU Wei ) LI Chun lei ) LI Zhao yu ) LI Ya li ) MA Ke li ) XIA Quan ) CUI Zhao chun ) |
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| Affiliation: | ZOU Wei(Department of Physiology,College of Life Sciences,Liaoning Normal University,Dalian 116024,China)LI Chun-lei,LI Zhao-yu,LI Ya-li,MA Ke-li,XIA Quan(Department of Biochemistry and Molecular Biology,Dalian Medical University,Dalian 116027,China)) |
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| Abstract: | To construct a plasmid carrying pemt2 and neo resistant genes for the mechanistic study of growth inhibition of pemt2 transfected hepatoma cells,pLNCX pemt2 vector with neo resistant gene was constructed,and transfected into CBRH 7919 hepatoma cells by calcium phosphate precipitation method.PCR,Western blot and [ 3H]SAM incorporation were used for checking transfection and for activity determination,respectively.An overexpression clone of PEMT2 was screened out in which the enzyme quantity was about 5 fold,and the enzyme activity was 2.1 fold higher than those of the control.The expression product had an M r of 22.5 kD.The cell generation time of the overxpression Clone was 43.22±7.11 h,but the control one was just 21.54±7.08 h.The results showed that the pLNCX pemt2 was successfully constructed and transfected into rat hepatoma cells,and a clone with over expression of PEMT2 was established.The growth of this clone was significantly retarded. |
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| Keywords: | Gene expression Gene transfection Hepatoma Phosphatidylethanolamine N-methyltransferase2 |
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