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| 中华蜜蜂NPC1蛋白AcNPC1的原核表达、多克隆抗体制备及功能鉴定 | |
| 作者姓名： | 刘永梅 史红霞 李颜 马振刚 王林玲 许金山 周泽扬 党晓群 |
| 作者单位： | 重庆师范大学重庆市动物生物学重点实验室重庆市媒介昆虫重点实验室 |
| 基金项目： | 重庆市自然科学基金面上项目(cstc2019jcyj-msxmX0564)；;现代农业产业技术体系建设专项资金资助(CARS-44-KXJ21)；;国家自然科学基金项目(31770160)；;重庆市教委科学技术研究项目(KJ201600559765)； |
| 摘 要： | 【目的】人类C型尼曼匹克病(Niemann-Pick disease type C, NPC)主要是由NPC1基因突变引起的一类遗传疾病。NPC1蛋白主要负责胞内胆固醇运输,同时也作为病毒侵染宿主细胞的重要受体之一近年来备受关注。本研究旨在探究NPC1蛋白与中华蜜蜂囊状幼虫病毒(Chinese sacbrood virus, CSBV)感染的关系。【方法】通过PCR扩增中华蜜蜂Apis cerana cerana AcNPC1基因;将其克隆至pET-30a原核表达载体,转化至大肠杆菌Escherichia coli RosettaTM(DE3)进行IPTG诱导表达,采用镍柱纯化重组蛋白,免疫小鼠制备多克隆抗体。设计并合成AcNPC1 siRNA,添食中华蜜蜂幼虫;运用RT-qPCR检测和分析中华蜜蜂CSBV添毒幼虫中AcNPC1的表达量,以及RNAi干扰后不同时间AcNPC1基因和CSBV病毒衣壳蛋白VP1基因在感染CSBV的中华蜜蜂幼虫中的表达水平。【结果】成功构建重组表达质粒pET-30a-AcNPC1,在大肠杆菌中获得高效表达的重组蛋白,目的蛋白大小约为36... |
| 关 键 词： | 中华蜜蜂 NPC1蛋白 原核表达 表达谱 RNA干扰 siRNA |