| 地中海拟无枝菌酸菌U32中生物素羧基载体蛋白结构基因的克隆、表达及转录 |
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| 引用本文： | 卢捷 姚玉峰 姜卫红 焦瑞身. 地中海拟无枝菌酸菌U32中生物素羧基载体蛋白结构基因的克隆、表达及转录[J]. 微生物学报, 2003, 43(1): 56-64 |
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| 作者姓名： | 卢捷 姚玉峰 姜卫红 焦瑞身 |
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| 作者单位： | 中国科学院上海生命科学研究院,植物生理生态研究所,微生物次生代谢分子调控开放实验室,上海,200032 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金重点项目资助 ( 1 0 0 39630 0 1 0 ) |
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| 摘 要： | 乙酰辅酶A羧化酶(Acetyl CoA Carboxylase EC 6.4.1.2, ACC)催化依赖于ATP的乙酰辅酶A羧化形成丙二酸单酰辅酶A，该反应是脂肪酸生物合成途径中的第一步，也是受到调控的关键一步。根据结核分枝杆菌(M. tuberculosis)和天蓝色链霉菌(S. coelicolor)中ACC-α亚基的氨基酸保守序列和地中海拟无枝菌酸菌U32对氨基酸密码子的使用偏好，设计简并引物以U32基因组DNA为模板扩增出一条约250bp的片段，并以此片段作探针成功地从U32基因组cosmid文库中克隆到相应的ACC-α亚基的编码基因accA。该基因对应的ORF长1797bp，编码一个598个氨基酸的蛋白，推算出的分子量是63,714Da；基因G+C mol%含量为70.1%，符合U32基因结构特征，距起始密码子GTG上游6个碱基处有链霉菌典型的RBS序列AGGAGG，并有生物素羧化酶特征的ATP结合区。利用pET28(b)系统构建表达载体，在E. coli BL21(DE3)中实现了accA的诱导表达，产物大部分以可溶形式存在，并通过Western Blot证明该蛋白上确有共价结合的生物素。Northern Blot分析了各种氮源对accA基因转录水平的不同影响。
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| 关 键 词： | 地中海拟无枝菌酸菌，乙酰辅酶A羧化酶，生物素羧基载体蛋白，转录调节 |
| 文章编号： | 0001-6209(2003)01-0056-09 |
| 修稿时间： | 2002-04-27 |
Cloning, Expression and Transcriptional Analysis of Biotin Carboxyl Carrier Protein Gene (accA) from Amycolatopsis mediterranei U32 |
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| Lu Jie Yao Yufeng Jiang Weihong Jiao Ruishen. Cloning, Expression and Transcriptional Analysis of Biotin Carboxyl Carrier Protein Gene (accA) from Amycolatopsis mediterranei U32[J]. Acta microbiologica Sinica, 2003, 43(1): 56-64 |
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| Authors: | Lu Jie Yao Yufeng Jiang Weihong Jiao Ruishen |
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| Affiliation: | Shanghai Institute of Plant Physiology and Ecology, Shanghai Institutes for Biological Sciences, Chinese Academy of Sciences, China. nic3602@scu.edu.cn |
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