稳定表达hACE2的293T细胞系的建立及功能分析 |
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引用本文: | 黄楠,郎巧利,李莉萍,杨希,刘春麟.稳定表达hACE2的293T细胞系的建立及功能分析[J].中国细胞生物学学报,2022(2):306-313. |
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作者姓名: | 黄楠 郎巧利 李莉萍 杨希 刘春麟 |
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作者单位: | 1. 重庆市畜牧科学院;2. 重庆医科大学附属第二医院眼科 |
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基金项目: | 重庆市自然科学基金面上项目(批准号:cstc2021jcyj-msxmX0876、cstc2020jcyj-msxm X0776);;国家自然科学基金(批准号:32000130)资助的课题~~; |
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摘 要: | 该研究旨在利用hACE2真核表达载体,通过电转法获得具有新型冠状病毒易感性的稳定表达hACE2的293T细胞株。将线性表达质粒pCMV-hACE2电转至293T细胞,经潮霉素B筛选后,利用间接免疫荧光(IFA)、RT-PCR、Western blot、流式分析法鉴定hACE2的表达,S-RBD蛋白和SARS-CoV-2假病毒分析细胞功能活性。利用250 μg/mL潮霉素B筛选获得了稳定高表达hACE2的细胞系293T-hACE2-D4。在该细胞中,RT-PCR检测到了大量hACE2基因的mRNA,Western blot、间接免疫荧光和流式分析法检测细胞表面hACE2蛋白表达情况(阳性细胞率为86.86%)。功能分析中,293T-hACE2-27-D4细胞不仅能够与SARS-Cov-2 S-RBD蛋白相结合(结合率达84.26%),并且能够成功感染新型冠状病毒假病毒。该研究构建的稳定表达hACE2的293T细胞不仅能与S-RBD蛋白结合,还对新冠假病毒具有易感性,是探究病毒感染机制的有利工具。
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关 键 词: | hACE2 稳定转染 293T细胞 新型冠状病毒 |
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