| 农杆菌介导的棉花枯萎病菌转化体系的优化 |
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| 引用本文： | 刘叶,阿依保他·托合达白,郭楠楠,柳自清,张博然,朱琦,顾爱星.农杆菌介导的棉花枯萎病菌转化体系的优化[J].微生物学通报,2021,48(9):2991-3001. |
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| 作者姓名： | 刘叶 阿依保他·托合达白 郭楠楠 柳自清 张博然 朱琦 顾爱星 |
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| 作者单位： | 新疆农业大学农学院 新疆 乌鲁木齐 830052;农林有害生物监测与安全防控重点实验室 新疆 乌鲁木齐 830052;新疆农业大学农学院 棉花教育部工程研究中心 新疆 乌鲁木齐 830052 |
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| 基金项目： | 新疆维吾尔自治区博士后科研流动站资助；转基因生物新品种培育科技重大专项（2018ZX0800501B） |
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| 摘 要： | 【背景】海岛棉相对陆地棉更易感枯萎病,一旦发生很难根治,使得枯萎病逐渐成为威胁新疆海岛棉产业发展的主要病害,但其致病机理目前还不是十分明确。【目的】揭示棉花枯萎病菌的遗传变异和致病机理,同时获得带有绿色荧光蛋白(Green Fluorescent Protein,GFP)标记的棉花枯萎病菌转化子用于观察其侵染海岛棉的途径。【方法】采用农杆菌介导的遗传转化(Agrobacterium tumefaciens-Mediated Transformation,ATMT)方法,对棉花枯萎病菌7号生理小种st89进行了遗传转化并对转化条件进行优化。【结果】农杆菌介导的遗传转化法转化棉花枯萎病菌的最佳条件为:150 mg/L的潮霉素浓度能完全抑制棉花枯萎病菌的生长,浓度为200 mg/L的头孢噻肟钠能完全抑制农杆菌LBA4404生长,农杆菌起始浓度OD_(600)为0.2,农杆菌预培养时间为8 h,棉花枯萎病菌分生孢子浓度为10~5个/mL,枯萎病菌孢子悬液和农杆菌LBA4404比例为1:1,乙酰丁香酮浓度为200μmol/mL,共培养时间为4 d,转化后培养温度25℃。利用优化的转化系统将GFP基因转入到棉花枯萎病菌中,转化效率最高可以达到252±7.37个转化子/10~5个孢子。PCR扩增以及荧光观察表明GFP基因能够正常表达。【结论】转GFP基因的枯萎病菌的获得为深入研究棉花枯萎病入侵的机理奠定了基础。
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| 关 键 词： | 棉花枯萎病菌 绿色荧光蛋白 农杆菌介导的遗传转化 |
| 收稿时间： | 2020/12/16 0:00:00 |
Optimization of Agrobacterium tumefaciens-mediated transformation system for Fusarium oxysporum |
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| Institution: | College of Agriculture, Xinjiang Agricultural University, Urumqi, Xinjiang 830052, China;Key Laboratory of the Pest Monitoring and Safety Control of Crops and Forests of the Universities of the Xinjiang Uygur Autonomous Region, Urumqi, Xinjiang 830052, China;Engineering Research Centre of Cotton, Ministry of Education, College of Agriculture, Xinjiang Agricultural University, Urumqi, Xinjiang 830052, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Fusarium oxysporum green fluorescent protein Agrobacterium tumefaciens-mediated transformation |
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