QsvR对副溶血弧菌VI型分泌系统1相关基因的转录调控 |
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引用本文: | 吴燕,仇越,吴齐敏,张苗苗,李雪,张义全,陆仁飞.QsvR对副溶血弧菌VI型分泌系统1相关基因的转录调控[J].微生物学报,2024,64(2):597-606. |
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作者姓名: | 吴燕 仇越 吴齐敏 张苗苗 李雪 张义全 陆仁飞 |
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作者单位: | 南通大学医学院, 江苏 南通 226019;南通市第三人民医院 南通大学附属南通第三医院检验科, 江苏 南通 226006;南京医科大学附属常州第二人民医院检验科, 江苏 常州 213000 |
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基金项目: | 南通市自然科学基金(JC2021027);南通市卫生健康委员会科研课题(QN2022044) |
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摘 要: | 【目的】研究调控蛋白QsvR对副溶血弧菌VI型分泌系统1 (type VI secretion system 1,T6SS1)相关基因的转录调控关系。【方法】提取野生株(wild type,WT)和qsvR突变株(ΔqsvR)的总RNA,采用实时定量PCR (quantitative real-time PCR,qPCR)研究QsvR对靶基因的调控关系;进而采用引物延伸法定位靶基因的转录起始位点和核心启动子区,并根据引物延伸产物丰度判断QsvR对靶基因的调控关系;将靶基因的调控区DNA序列克隆入pHRP309质粒中的β-半乳糖苷酶基因上游(LacZ重组质粒),并将重组质粒转化入WT和ΔqsvR中,通过LacZ报告基因融合试验研究QsvR对靶基因的调控关系;将LacZ重组质粒分别转化入含有pBAD33或pBAD33-qsvR的大肠杆菌100lpir中,进一步采用LacZ报告基因融合试验研究在异体宿主中QsvR对靶基因的调控关系;PCR扩增靶基因调控区DNA序列,同时表达并纯化His-QsvR重组蛋白,采用凝胶阻滞试验(electrophoresis mobility shift assay,EMSA)研究His-QsvR对靶基因调控区DNA序列是否具有直接的结合作用。【结果】qPCR结果显示,与WT相比,ΔqsvR中T6SS1相关基因VP1388 (操纵子VP1388-1390首基因)和hcp1 (操纵子VP1393-1406首基因)的转录水平显著性升高,表明QsvR抑制VP1388和hcp1的转录;引物延伸结果显示VP1388和hcp1各有一个转录起始位点,分别为C (-64)和T (-62),且它们的转录活性受QsvR的抑制;LacZ报告基因融合试验结果显示QsvR可以抑制副溶血弧菌和EC100lpir中VP1388和hcp1的启动子区转录活性;EMSA结果显示His-QsvR对VP1388和hcp1的启动子区DNA序列具有直接的结合活性。【结论】QsvR对T6SS1相关操纵子VP1388-1390和VP1393-1406的转录具有直接的抑制作用。
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关 键 词: | 副溶血弧菌 QsvR VI型分泌系统1 (T6SS1) 转录调控 |
收稿时间: | 2023/7/22 0:00:00 |
修稿时间: | 2023/8/30 0:00:00 |
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