| 敲除LTA4H基因的PK-15细胞系构建及其对口蹄疫病毒复制的影响 |
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| 引用本文： | 王家丽,蒲秀瑛,杨帆,邵文华,黄梦瑶,曹伟军,郑海学,张伟.敲除LTA4H基因的PK-15细胞系构建及其对口蹄疫病毒复制的影响[J].微生物学报,2024,64(3):733-744. |
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| 作者姓名： | 王家丽 蒲秀瑛 杨帆 邵文华 黄梦瑶 曹伟军 郑海学 张伟 |
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| 作者单位： | 兰州理工大学生命科学与工程学院, 甘肃 兰州 730050;中国农业科学院兰州兽医研究所/兰州大学动物医学与生物安全学院 动物疫病防控全国重点实验室, 甘肃 兰州 730000;甘肃省病原生物学基础学科研究中心, 甘肃 兰州 730046 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金(32102639，32072831)；国家重点研发计划(2021YFD1800300)；甘肃省杰出青年基金(21JR7RA026)；兰州大学中央高校基本科研业务费专项资金(lzujbky-2022-ey20)；“十四五”广东省农业科技创新十大主攻方向“揭榜挂帅”项目(2023SDZG02)；国家生猪产业技术体系(CARS-35) |
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| 摘 要： | 【目的】利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建白三烯A4水解酶(leukotriene A4 hydrolase, LTA4H)基因缺失的猪肾细胞系(porcine kidney-15, PK-15),探究LTA4H对口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus, FMDV)复制的影响,为开展LTA4H功能研究及调控病毒复制机制研究提供理论依据。【方法】设计2条针对猪LTA4H基因的引导RNA (small guide RNA, sgRNA),分别构建至载体pX459-puro-MCS中;将CRISPR重组质粒转染PK-15细胞,用嘌呤霉素(puromycin)抗生素筛选,并通过有限稀释法筛选单克隆细胞,之后通过Western blotting和测序检测LTA4H基因的敲除,获得LTA4H基因功能缺失细胞系。使用Western blotting、RT-qPCR及病毒滴度测定等方法检测敲除LTA4H基因后对FMDV复制及相关蛋白的表达情况。【结果】获得的单克隆敲除细胞系与野生型细胞相比,能够显著抑制FMDV复制。【结论】本研究成功构建了LTA4H基因敲除的PK-15细胞系,证明LTA4H对FMDV的复制具有促进作用,研究结果为后续LTA4H功能研究提供理论依据。
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| 关 键 词： | CRISPR/Cas9 白三烯A4水解酶 细胞系 口蹄疫病毒 |
| 收稿时间： | 2023/7/29 0:00:00 |
| 修稿时间： | 2023/12/13 0:00:00 |
Construction of PK-15 cell line with LTA4H gene knockout and its impact on the replication of foot-and-mouth disease virus |
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| WANG Jiali,PU Xiuying,YANG Fan,SHAO Wenhu,HUANG Mengyao,CAO Weijun,ZHENG Haixue,ZHANG Wei.Construction of PK-15 cell line with LTA4H gene knockout and its impact on the replication of foot-and-mouth disease virus[J].Acta Microbiologica Sinica,2024,64(3):733-744. |
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| Authors: | WANG Jiali PU Xiuying YANG Fan SHAO Wenhu HUANG Mengyao CAO Weijun ZHENG Haixue ZHANG Wei |
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| Institution: | School of Life Science and Engineering, Lanzhou University of Technology, Lanzhou 730050, Gansu, China;State Key Laboratory of Animal Disease Prevention and Control, Lanzhou Veterinary Institute, Chinese Academy of Agricultural Sciences/College of Animal Medicine and Biosafety, Lanzhou University, Lanzhou 730000, Gansu, China;Gansu Provincial Research Center of Pathogen Biology, Lanzhou 730046, Gansu, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | CRISPR/Cas9 leukotriene A4 hydrolase cell lines foot-and-mouth disease virus |
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