| 丙酮破碎法提取重组大肠杆菌表达的转谷氨酰胺酶酶原 |
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| 引用本文： | 沈徐凯,周斌,王云艳,王斌,杨慧林,潘力. 丙酮破碎法提取重组大肠杆菌表达的转谷氨酰胺酶酶原[J]. 生物技术通报, 2011, 0(5) |
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| 作者姓名： | 沈徐凯 周斌 王云艳 王斌 杨慧林 潘力 |
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| 作者单位： | 华南理工大学生物科学与工程学院,广州,510006 |
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| 摘 要： | 以茂原链霉菌(Streptomyces mobaraensis)的基因组DNA为模板,PCR扩增出转谷氨酰胺酶酶原基因(pro-transglutaminase,pro-TG)),PCR产物连接到pMDl8-T克隆载体后亚克隆到表达载体pET-22b(+),转化到表达宿主大肠杆菌BL2l(DE3).重组大肠杆菌经IPTG诱导后,转谷氨酰胺酶酶原(pro-TG)主要以可溶性蛋白表达.菌体离心后用丙酮高速搅拌破碎细胞,亲和层析成功地纯化到了转谷氨酰胺酶酶原.转谷氨酰胺酶酶原经胰蛋白酶切割激活后其酶活为502.8 U/g CDM(菌体干重).采用BSA交联试验证实成熟的转谷氨酰胺酶(TG)具有功能.采用丙酮破碎法提取重组大肠杆菌表达的转谷氨酰胺酶酶原对大规模工业化生产转谷氨酰胺酶进行了有益的探索.
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| 关 键 词： | 转谷氨酰胺酶酶原 表达 纯化 丙酮破碎 BSA交联 |
Extraction of Pro-Transglutaminase Production in Recombinant Escherichia coli using Acetone Cell-Break |
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| Shen Xukai,Zhou Bin,Wang Yunyan,Wang Bin,Yang Huilin,Pan Li. Extraction of Pro-Transglutaminase Production in Recombinant Escherichia coli using Acetone Cell-Break[J]. Biotechnology Bulletin, 2011, 0(5) |
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| Authors: | Shen Xukai Zhou Bin Wang Yunyan Wang Bin Yang Huilin Pan Li |
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