| 枯草杆菌manA基因的克隆及定点突变 |
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| 引用本文： | 毛绍名,章怀云,张学文. 枯草杆菌manA基因的克隆及定点突变[J]. 微生物学通报, 2007, 34(3): 0528-0532 |
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| 作者姓名： | 毛绍名 章怀云 张学文 |
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| 作者单位： | 1. 中南林业科技大学生命科学与技术学院,长沙,410004
2. 湖南农业大学生物科学技术学院,长沙,410128 |
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| 基金项目： | 湖南省杰出青年科学基金 |
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| 摘 要： | manA是编码β-甘露聚糖酶(β-1,4-mannan mannohydrolase EC3.2.1.78)的基因。将枯草杆菌A33株的manA基因插入到pET-32a载体,并在大肠杆菌BL21(DE3)中实现了异源非融合表达,表达活力为41.58U/mL。为了提高酶的表达活力,当采用PCR介导的定点突变技术将该基因第2号密码子CUU突变为GUU,构建成突变表达载体pET-32a-manA*并转入大肠杆菌BL21(DE3)中表达,目标酶表达活力增加到138.65U/mL。说明当β-甘露聚糖酶N端第二号氨基酸由亮氨酸突变为缬氨酸后,酶在大肠杆菌中的表达活力大大提高。推测是由于突变后的β-甘露聚糖酶在大肠杆菌中的稳定性增强所致。突变表达的β-甘露聚糖酶最适作用温度和pH值并没有发生明显改变。
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| 关 键 词： | β-甘露聚糖酶 基因克隆 定点突变 |
| 文章编号： | 0253-2654（2007）03-0528-05 |
| 修稿时间： | 2006-09-14 |
Cloning and Site-directed Mutation of manA Gene from Bacillus subtilis |
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| MAO Shao-Ming,ZHANG Huai-Yun and ZHANG Xue-Wen. Cloning and Site-directed Mutation of manA Gene from Bacillus subtilis[J]. Microbiology China, 2007, 34(3): 0528-0532 |
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| Authors: | MAO Shao-Ming ZHANG Huai-Yun ZHANG Xue-Wen |
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| Affiliation: | College of Life Science and Technology, Central South University of Forestry & Technology,Changsha 410004,College of Life Science and Technology, Central South University of Forestry & Technology,Changsha 410004 and College of Bioscience and Technology, Hunan Agricultural University, Changsha 410128 |
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