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里氏木霉内切-β-甘露聚糖酶基因在毕赤酵母中的表达
引用本文:韦跃华,毛爱军,何永志,乔宇,董志扬.里氏木霉内切-β-甘露聚糖酶基因在毕赤酵母中的表达[J].生物工程学报,2005,21(6):878-883.
作者姓名:韦跃华  毛爱军  何永志  乔宇  董志扬
作者单位:中国科学院微生物研究所微生物资源国家重点实验室,北京,100080
基金项目:ThisworkwassupportedbyGrantfromChineseNationalProgramsforHighTechnologyResearchandDevelopment(No.2004AA214080).
摘    要:采用PCR方法从里氏木霉(Trichoderma reesei)基因组中获得含有两个内含子的内切-β-甘露聚糖酶全长基因,末端重叠延伸PCR去除内含子后,将其插入到巴斯德毕赤酵母(Picher pastoris)表达载体pPIC9K中,位于α-因子信号肽序列的下游,并与之同框,获得重组质粒pM242。重组质粒线性化后用电击法转化毕赤酵母菌株GS115。经大量筛选,获得高效分泌表达内切甘露聚糖酶的毕赤酵母工程菌株Gpmf25。摇瓶发酵结果表明,培养基中甘露聚糖酶的活力可达12.5IU/mL。重组酶最适pH和最适反应温度分别为5.0和80℃,在pH5.0~6.0时酶活稳定,在pH5.4时70℃保温30min酶活维持50%以上。

关 键 词:内切甘露聚糖酶,分泌表达,酶学性质
文章编号:1000-3061(2005)06-0878-06
收稿时间:06 22 2005 12:00AM
修稿时间:07 25 2005 12:00AM
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