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| 利用分泌型荧光素酶体外长期监测小鼠肝脏microRNA活性 | |
| 引用本文： | 王刚,董小岩,胡键阳,田文洪,尉迟捷,王岳,吴小兵.利用分泌型荧光素酶体外长期监测小鼠肝脏microRNA活性[J].中国科学:生命科学,2011,41(4):273-280. |
| 作者姓名： | 王刚 董小岩 胡键阳 田文洪 尉迟捷 王岳 吴小兵 |
| 作者单位： | 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所, 病毒基因工程国家重点实验室, 北京 100052; 复旦大学生命科学学院, 遗传工程国家重点实验室, 上海 200433; 北京五加和分子医学研究所, 北京 100176; 宁夏医科大学附属医院肝胆外科, 银川 750004 |
| 基金项目： | 国家科技重大专项(批准号: 2008ZX10002-023 和2008ZX10001-012)和病毒基因工程国家重点实验室自主课题(批准号: 2008-S-0003)资助项目 |
| 摘 要： | 活体动物microRNA（miRNA）检测技术对阐明miRNA的生物学功能非常重要.但是,目前缺乏一种方便灵敏的实时反映活体动物miRNA活性及其变化的体外监测手段.通过在分泌型荧光素酶Gluc（Gaussia princeps luciferase）mRNA的3′非翻译区插入相应miRNA的靶序列构建一系列miRNA传感器.将miRNA传感器体外转染培养细胞和通过水动力注射方法转染小鼠肝脏,通过检测细胞培养上清和外周血液中的Gluc来反映细胞内和活体动物肝脏的miRNA活性.结果显示,CMV启动子驱动的miRNA传感器可以长期监测体外培养细胞中的miRNA和短期监测小鼠肝脏的miRNA,但由于启动子在肝脏的沉默不能用于长期监测肝脏miRNA;CAG启动子驱动的传感器则成功地实现了对肝脏内源性miR-122,miR-142和miR-34a以及对肝脏过表达的miR-34a的长期实时监测.利用以Gluc为报告基因的miRNA传感器,通过检测外周血Gluc可以方便地在体外长期连续监测小鼠肝脏的miRNA. |
| 关 键 词： | microRNA传感器 分泌型Gaussia荧光素酶 体外监测 |
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