ERCC1对H520细胞Mdr1及SP细胞的影响分析 |
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作者姓名: | 凌桂琴 陈冬波 王保庆 |
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作者单位: | 徐州医学院第二附属医院肿瘤内科; |
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基金项目: | 编号:XZZD1255。名称:ERCC1对H520细胞Mdr1及SP细胞比例的影响,2012年江苏省徐州市科技项目 |
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摘 要: | 目的:分析ERCC1对H520细胞中Mdr1及SP细胞比例的影响。方法:利用RNA干扰技术构建ERCC1-shRNA重组质粒表达载体,转染并筛选出阳性稳定转染的H520细胞;采用RT-PCR和WesternBlot的方法检测ERCC1对H520细胞多药耐药1(Mdr1)的影响;采用流式细胞仪检测ERCC1对H520细胞SP细胞比例的影响。结果:RT-PCR检测出Mdr1 mRNA在含有ERCC1-shRNA的H520细胞和含有空载体的细胞中和内参的A比值分别为0.423±0.147和0.468±0.02(n=5),两者有显著性差异;Western-Blot检测出Mdr1蛋白浓度在含有ERCC1-shRNA的H520细胞较含有空载体的细胞中明显降低。含有ERCC1-shRNA的H520细胞SP细胞比例达到0.8%,而含有空载体的H520细胞的SP细胞比例则达到2.2%。结论:RNA干扰技术可以构建重组质粒,稳定转染的H520细胞能被筛选出,当ERCC1基因被抑制时,Mdr1基因也会收到抑制,同时使H520细胞SP细胞比例明显降低。
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关 键 词: | ERCC1 Mdr1 H520细胞 SP细胞 |
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