人WWP2蛋白的重组表达和多克隆抗体的制备

[目的]克隆、表达并纯化人E3泛素连接酶蛋白WWP2的部分肽段(aa 324-517),制备兔源抗WWP2多克隆抗体并初步鉴定。[方法]PCR法从人胚肾细胞HEK-293T中扩增WWP2蛋白部分肽段的编码序列并构建原核表达质粒,大肠杆菌中诱导表达;GST亲和层析法纯化后进行TEV酶切,免疫新西兰兔制备多克隆抗体;间接ELISA、Western Blot、免疫荧光等方法检测抗体的灵敏度和特异性。[结果]构建了原核表达质粒pGEX-GST-WWP2(aa 324-517),原核表达并纯化了该重组蛋白。间接ELISA测定抗体效价可达1∶100 000以上,Western Blot检测该抗体可特异性识别体外纯化的WWP2蛋白和细胞内源性WWP2蛋白,细胞免疫荧光可检测到内源性WWP2蛋白。[结论]成功克隆、表达与纯化WWP2蛋白的部分肽段,制备出抗WWP2蛋白的多克隆抗体,可用于WWP2的免疫印迹和细胞免疫荧光分析。