| 使用透明质酸钠复合海藻酸钠水凝胶球3D培养软骨细胞抑制细胞去分化的研究 |
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| 引用本文： | 刘鑫成,孟星星,祝 瑞,张煜珅,成西侠,范宏斌.使用透明质酸钠复合海藻酸钠水凝胶球3D培养软骨细胞抑制细胞去分化的研究[J].现代生物医学进展,2017,17(16):3049-3053. |
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| 作者姓名： | 刘鑫成 孟星星 祝 瑞 张煜珅 成西侠 范宏斌 |
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| 作者单位： | 第四军医大学西京医院骨科 陕西 西安 710032;第四军医大学航空航天卫生学教研室 陕西 西安 710032;空军工程大学理学院 陕西 西安 710051 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目（31170936, 31470936） |
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| 摘 要： | 目的:验证海藻酸钠(Alginate,Alg)水凝胶球添加透明质酸钠(Sodium hyaluronate,HA)后,对大鼠膝软骨细胞体外3D培养时软骨细胞去分化的抑制情况。方法:用Ⅱ型胶原酶消化法获取2周龄SD大鼠膝关节原代软骨细胞,体外培养传代至P2。细胞分为2组,1组用2%海藻酸钠水凝胶球3D培养(Alg组),另一组用2%海藻酸钠+1%透明质酸钠的水凝胶球3D培养(Alg/HA组),采用正交法制作海藻酸钠水凝胶球。培养14天后,两组各取水凝胶球进行死活细胞染色观察细胞状态。其他水凝胶球收集后用4%多聚甲醛固定,30%蔗糖溶液脱水,OCT(Optimal cutting temperature compound)包埋剂包埋切片,采用苏木精-伊红染色法(Hematoxylin-eosin staining,HE染色)、甲苯胺蓝染色观察软骨细胞形态;采用阿利新蓝染色观察对比糖胺聚糖(Glycosaminoglycan,GAG)含量;采用免疫荧光染色对比Ⅱ型胶原(Collagen typeⅡ,ColⅡ)含量;采用蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测软骨细胞ColⅡ和聚蛋白多糖(Aggrecan,ACAN)的表达情况。结果:死活细胞染色显示两组水凝球内软骨细胞状态良好,几乎无死细胞;阿利新蓝染色显示Alg/HA组与Alg组相比软骨细胞分泌更多的GAG;免疫荧光染色显示Alg/HA组比Alg组软骨细胞内含更多的Ⅱ型胶原;Western blot显示Alg/HA组软骨细胞比Alg组ColⅡ的蛋白表达更多。结论:含透明质酸钠的海藻酸钠水凝胶可以更好地维持软骨细胞的表型,抑制软骨细胞去分化。
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| 关 键 词： | 软骨细胞 透明质酸钠 海藻酸钠 水凝胶 3D培养 |
| 收稿时间： | 2016/10/22 0:00:00 |
| 修稿时间： | 2016/11/10 0:00:00 |
The Application of Sodium Alginate Hydrogel Beads with Hyaluronic Acid in the Three-dimensional Culture of Chondrocytes to Inhibit the Dedifferentiation of Chondrocytes |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Chondrocytes Sodium alginate Alginate Hydrogel Three-dimensional culture |
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