人KRT2促进体外培养的羊驼皮肤黑色素细胞的黑色素生成

基因表达谱显示，绵羊角蛋白2（keratin2, Krt2）的mRNA在不同毛色皮肤的表达不同，暗示Krt2 基因可能对皮肤黑色素生成有一定的影响。为探索角蛋白2对体外培养的羊驼皮肤黑色素细胞黑色素生成的影响，首先采用PCR扩增产物测序，结合DNAMAN 软件比对分析发现，羊驼Krt2 编码序列（cDNA）与NCBI公布的人KRT2高度同源（91%）；将人KRT2添加于培养的羊驼皮肤黑色素细胞，观察人KRT2对羊驼皮肤黑色素细胞黑色素的生成作用。免疫组织化学显示，外源性的人KRT2处理羊驼皮肤黑色素细胞72 h后，黑色素细胞的细胞质中Krt2表达增强。实时定量PCR及Western 印迹实验揭示，与胎牛血清清蛋白处理的羊驼皮肤黑色素细胞比较，1 ng/mL、10 ng/mL和100 ng/mL人KTR2处理的羊驼皮肤黑色素细胞酪氨酸酶（Tyr）、酪氨酸相关蛋白-1（Tyrp1）、小眼畸形相关转录因子（Mitf）基因表达明显上调（P <0.05）；尤其在添加10 ng/mL KTR2的细胞中，3个基因的mRNA相对表达水平升高尤其显著，分别是对照细胞的4倍、10倍和12.9倍（P<0.01），蛋白质相对表达水平分别是对照细胞的2倍、2.1倍和1.7倍（P<0.01）。分光光度法测量A490结果证明，1 ng/mL、10 ng/mL和100 ng/mL人KTR2处理的羊驼皮肤黑色素细胞产生的黑色素含量分别是对照细胞的1.3倍（P <0.05）、1.8倍（P <0.01）和1.5倍（P <0.05）。上述结果说明，人KTR2处理可通过刺激羊驼皮肤黑色素细胞黑色素合成相关信号通路，促进黑色素的合成。

Human KRT2 Promotes Melanogenesis in Alpaca Skin Melanocytes in Culture