| 甘露聚糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶2 EGF片段多克隆抗体的制备及鉴定 |
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| 引用本文： | 张培星,李涓,窦倩倩,贾晓晖.甘露聚糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶2 EGF片段多克隆抗体的制备及鉴定[J].微生物学免疫学进展,2018(2). |
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| 作者姓名： | 张培星 李涓 窦倩倩 贾晓晖 |
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| 作者单位： | 河北省沧州中西医结合医院实验诊断科;河北北方学院医学检验学院病原生物与免疫学研究所免疫学教研室 |
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| 摘 要： | 目的制备甘露聚糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶2(MBL-associated serine protease-2,MASP-2)EGF功能区蛋白的多克隆抗体并进行鉴定,为后续研究奠定基础。方法利用带有EGF基因片段的p GEX-6P-2原核载体诱导表达GST-EGF融合蛋白,并采用商品化GST-Beads进行纯化;将纯化的融合蛋白作为抗原,与弗氏完全佐剂充分混合后,免疫5周龄BALB/c雌性健康小鼠,制备多克隆抗体;利用琼脂双扩散法检测多克隆抗体的效价,并进一步应用Western blot鉴定多克隆抗体的特异性及效价。结果成功表达并纯化EGF蛋白,以此成功制备出特异性强的GST-EGF融合蛋白的多克隆抗体,与其他蛋白无交叉反应;琼脂双扩散法检测的EGF抗体效价为1∶8;Western blot检测的EGF抗体效价大于1∶2 000。结论成功制备出具有特异性强且效价高的GST-EGF蛋白的多克隆抗体。
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| 关 键 词： | 甘露聚糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶2 表皮生长因子功能区 多克隆抗体 琼脂双扩散法 免疫印迹 |
Preparation and identification of polyclonal antibodies against EGF functional domains from mannan binding lectinassociated serine protease-2 |
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