| 应用CRISPRi技术敲低耻垢分枝杆菌异柠檬酸脱氢酶基因 |
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| 引用本文： | 周凤竹,胡亚文,葛文雪,张雪莲.应用CRISPRi技术敲低耻垢分枝杆菌异柠檬酸脱氢酶基因[J].微生物与感染,2018,13(4):207-212. |
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| 作者姓名： | 周凤竹 胡亚文 葛文雪 张雪莲 |
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| 作者单位： | 复旦大学生命科学学院遗传工程国家重点实验室，上海 200433 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金（81673482），上海市科技支撑项目（15431900200） |
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| 摘 要： | 成簇的规律间隔的短回文重复序列干扰(clustered regularly interspaced short palindromic repeat interference，CRISPRi)是一种新型转录抑制技术，该系统包含RNA介导的DNA内切酶dCas9和针对目的基因的特异性单向导RNA(single guide RNA，sgRNA)，通过形成DNA识别复合物特异性识别相应DNA序列以抑制目的基因的转录。异柠檬酸脱氢酶(isocitrate dehydrogenase，ICD)是三羧酸循环中的关键代谢酶，在分枝杆菌的碳代谢过程中发挥重要作用。本研究利用CRISPRi高效抑制分枝杆菌特定基因表达的方法构建耻垢分枝杆菌icd敲低(icd knockdown，ICD-KD)株。定量聚合酶链反应(quantitative polymerase chain reaction，qPCR)和蛋白免疫印迹检测结果显示，耻垢分枝杆菌中icd转录水平与ICD蛋白表达水平显著下降，表明采用CRISPRi技术成功构建了耻垢分枝杆菌ICD-KD株。进一步研究ICD-KD株的生长情况，测定其在固体培养基点板及液体培养基中的生长曲线，结果均显示ICD-KD株生长速率明显减慢，同时菌体内ICD酶活显著降低，提示ICD对分枝杆菌的生长存活起重要作用。本研究使用CRISPRi技术快速构建了分枝杆菌必需基因的敲低菌株，为后续研究分枝杆菌ICD在碳源代谢通路中的功能和碳通量流向调控机制提供了重要基础。
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| 关 键 词： | 耻垢分枝杆菌 异柠檬酸脱氢酶 成簇的规律间隔的短回文重复序列干扰 |
Knockdown of isocitrate dehydrogenase gene in Mycobacterium smegmatis using CRISPRi |
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| ZHOU Fengzhu,HU Yawen,GE Wenxue,ZHANG Xuelian.Knockdown of isocitrate dehydrogenase gene in Mycobacterium smegmatis using CRISPRi[J].Journal of Microbes and Infection,2018,13(4):207-212. |
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| Authors: | ZHOU Fengzhu HU Yawen GE Wenxue ZHANG Xuelian |
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| Institution: | State Key Laboratory of Genetic Engineering, School of Life Sciences, Fudan University, Shanghai 200433, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Mycobacterium smegmatis Isocitrate dehydrogenase Clustered regularly interspaced short palindromic repeat interference (CRISPRi) |
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