利用重组大肠杆菌生产α-环糊精葡萄糖基转移酶

将来源于软化类芽孢杆菌（Paenibacillus macerans）的α-环糊精葡萄糖基转移酶（α-CGT）基因插入含pelB信号肽的质粒pET-20b（＋）中，构建了表达载体pET-20b（＋）／cgt，并将其转化表达宿主E.coli BL21（DE3）。对重组菌E．coli BL21／pET-cgt进行摇瓶发酵条件的优化，确定了其胞外表达α-CGT酶的最适条件：葡萄糖8g/L，乳糖0．5g/L，蛋白胨12g/L，酵母膏24g/L，K2HPO472mmol／L，KH2PO417mmol／L，CaCl2 2．5mmol／L；初始pH为7．0，诱导温度为25℃。在该条件下培养90h后最终α-CGT酶的胞外比活达到22．1u／mL，与来源菌Pmacerans所产天然酶比活相比提高了42倍，实现了α-CGT酶的高效生产。将基因工程菌在上述条件下于3L发酵罐中发酵，90h后胞外酶比活达到22．6U／mL，证实了工业化放大的可能性。