大熊猫犬瘟热病毒H基因重组山羊痘病毒的构建和鉴定 |
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作者姓名: | 程松 王和兴 郑敏 罗满林 单芬 李婉萍 陈武 |
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作者单位: | 广州动物园,广州,510070;红河州农业局红河州动物疫病预防控制中心,蒙自,661199;广西动物疫病预防控制中心,南宁,530001;华南农业大学兽医学院,广州,510642 |
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摘 要: | 本研究参照GenBank上已公布的大熊猫犬瘟热病毒(CDV)H编码的基因序列,对其抗原保守结构和识别区域进行修饰,将CDV保护性抗原H基因克隆到pMDTK-pEL载体中,然后运用酶切、连接将表达盒PELH构建到pTK-Eg载体中,从而获得重组转移载体质粒pTK-H-Eg。将重组转移载体质粒pTK-H-Eg与GTPV AV41株共转染BHK细胞,使其在细胞内发生同源重组,获得重组CDV的H基因的山羊痘病毒,然后在Vero细胞上加压筛选,利用gpt培养基筛选到稳定表达EGFP的重组病毒。通过PCR、免疫荧光以及Western Blot鉴定,证明CDV H基因成功构建到GTPV基因组中,并且在细胞中获得了正确表达。本研究获得了表达CDV H基因重组山羊痘病毒,并命名为vpTK-H-Eg。
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关 键 词: | 犬瘟热病毒(CDV) 同源重组 重组山羊痘病毒 |
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