| 茶树黄酮醇合成酶基因的克隆与原核表达 |
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| 引用本文： | 马春雷,陈亮. 茶树黄酮醇合成酶基因的克隆与原核表达[J]. 基因组学与应用生物学, 2009, 28(3). DOI: 10.3969/gab.028.000433 |
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| 作者姓名： | 马春雷 陈亮 |
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| 作者单位： | 中国农业科学院茶叶研究所茶树资源与改良研究中心,国家茶树改良中心,杭州,310008;中国农业科学院茶叶研究所茶树资源与改良研究中心,国家茶树改良中心,杭州,310008 |
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| 基金项目： | 国家高技术研究发展计划(863计划)，现代农业产业技术体系建设专项资金共同资助项目 |
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| 摘 要： | 本研究采用EST测序技术和RT-PCR技术,获得了一个茶树茶多酚代谢中的重要基因--黄酮醇合成酶(FLS)基因,在GenBank登录(GenBank accessionNo.EF205150),其序列全长1317 bp,其中开放阅读框长996bp,编码331个氨基酸,3′端有一个明显的多聚腺苷酸加尾信号,推测的蛋白分子量约为37.5kD,理论等电点为5.80.序列分析表明它与葡萄FLS基因序列的亲缘关系比较近.将该基因重组到表达载体pET-32a(+)中进行原核表达,经IFTG诱导、SDS-PAGE检测,结果表明茶树黄酮醇合成酶基因能在大肠杆菌BL21中表达,电泳检测到一条大约61 kD的外源蛋白,与预测的融合蛋白分子量相符.用Ni-NTA亲和层析柱对融合蛋白进行纯化,得到了纯度在90%以上的纯化蛋白,为进一步研究PET-FLS融合蛋白的活性及功能奠定了基础.
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| 关 键 词： | 茶树 黄酮醇合成酶 基因克隆 序列分析 原核表达 |
Cloning and Prokaryotic Expression of Flavonol Synthase Gene from Tea Plant |
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| Ma Chunlei,Chen Liang. Cloning and Prokaryotic Expression of Flavonol Synthase Gene from Tea Plant[J]. Genomics and Applied Biology, 2009, 28(3). DOI: 10.3969/gab.028.000433 |
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| Authors: | Ma Chunlei Chen Liang |
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