| 小鼠睾丸特异性基因Vad1.2重组蛋白的构建及多克隆抗体制备 |
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| 引用本文： | 孙源,刘见桥,杜红姿,曹善柏. 小鼠睾丸特异性基因Vad1.2重组蛋白的构建及多克隆抗体制备[J]. 激光生物学报, 2014, 0(4): 331-337 |
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| 作者姓名： | 孙源 刘见桥 杜红姿 曹善柏 |
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| 作者单位： | 广州医科大学附属第三医院生殖医学中心,广东省生殖医学重点实验室,广东省产科重大疾病重点实验室,广东省普通高校生殖与遗传重点实验室,广东广州510150 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金青年科学基金项目（31301178）; 广东省自然科学基金项目（S2012010008363）; 广医三院院内项目（2012Y08） |
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| 摘 要： | 目的：构建小鼠睾丸特异性基因Vad1.2重组蛋白,制备多克隆抗体。方法：将小鼠睾丸组织Vad1.2转录本行RT-PCR扩增,通过DNA重组技术插入克隆载体p ET15b,进行酶切及DNA序列分析。将表达载体转化入大肠杆菌BL21（DE3）RIL感受态细胞,10 mmol/L IPTG诱导表达重组蛋白,通过10%SDS-PAGE、Western blotting及质谱分析进行鉴定。随后对重组Vad1.2蛋白进行纯化和进一步鉴定。最后,制备兔抗小鼠Vad1.2多克隆抗体,并通过Vad1.2-EGFP质粒转染GC-2spd（ts）细胞对其特异性进行验证。结果：大肠杆菌BL21（DE3）RIL细胞中诱导表达并纯化的小鼠Vad1.2重组蛋白构建正确并经Western blotting和质谱分析得到证实。所制备的多克隆抗体可特异性识别GC-2spd（ts）细胞中过表达的Vad1.2-EGFP融合蛋白。结论：成功构建小鼠Vad1.2重组蛋白,并制备多克隆抗体,为Vad1.2基因的进一步研究奠定了实验基础。
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| 关 键 词： | 精子发生 Vad1.2 重组蛋白 多克隆抗体 小鼠 |
Construction and Polyclonal Antibody Preparation of Recombinant Protein Based on Testis-specific Gene Vad1.2 |
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| SUN Yuan,LIU Jianqiao,DU Hongzi,CAO Shanbo. Construction and Polyclonal Antibody Preparation of Recombinant Protein Based on Testis-specific Gene Vad1.2[J]. ACTA Laser Biology Sinica, 2014, 0(4): 331-337 |
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| Authors: | SUN Yuan LIU Jianqiao DU Hongzi CAO Shanbo |
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| Affiliation: | ( Center for Reproductive Medicine, the Third Affiliated Hospital of Guangzhou Medical University ; Key Laboratory for Reproductive Medicine of Guangdong Province; Key Laboratory for Major Obstetric Diseases of Guangdong Province ; Key Laboratory of Reproduction and Genetics of Guangdong Higher Education Institutes, Guangzhou 510150, Guangdong, China) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | spermatogenesis Vad1.2 recombinant protein polyclonal antibody mice |
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