| 不吸水链霉菌基因文库的构建及初步筛选 |
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| 引用本文： | 桓明辉,陈飞,吴红艳,关艳丽,王志,程永涛. 不吸水链霉菌基因文库的构建及初步筛选[J]. 生物技术通报, 2009, 0(1) |
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| 作者姓名： | 桓明辉 陈飞 吴红艳 关艳丽 王志 程永涛 |
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| 作者单位： | 1. 辽宁省微生物科学研究院,朝阳,122000
2. 辽宁省朝阳市卫生学校,朝阳,122000 |
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| 摘 要： | 采用碱裂解法从不吸水链霉菌提取染色体DNA,用Sau3AI对染色体DNA进行部分水解,利用透析袋法回收3.5～9kb之间的DNA片段。以pUC18为载体,用BamHI对其进行酶切,再用热敏磷酸酶去磷酸化,酶切产物与外源DNA按一定比例混合后,加入T4DNA连接酶进行连接。连接产物用受体菌E.coliDH5α进行转化,根据α-互补性质产生的颜色反应,挑选白色菌落,构建了相应的不吸水链霉菌基因文库。分别利用特异性探针2-1-1及1-2-1对不吸水链霉菌基因文库进行筛选,利用DIG-Ⅱ-dUTP对特异性探针进行标记,与基因文库中的阳性转化子进行Southern杂交,通过显色反应对杂交结果进行检测,由于时间关系,暂未筛选出阳性克隆,但这些工作对以后的相关实验研究具有很好的借鉴作用。
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| 关 键 词： | 不吸水链霉菌 基因文库 地高辛探针标记 Southem杂交 菌落原位杂交 |
Construction and Initial Screening of Gene Library of the Streptomyces ahygroscopicus |
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| Huan Minghui,Chen Fei,Wu Hongyan,Guan Yanli,Wang Zhi,Cheng Yongtao. Construction and Initial Screening of Gene Library of the Streptomyces ahygroscopicus[J]. Biotechnology Bulletin, 2009, 0(1) |
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| Authors: | Huan Minghui Chen Fei Wu Hongyan Guan Yanli Wang Zhi Cheng Yongtao |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Streptomyces ahygroscopicus Gene library Digoxigeninlabele probe Southern hybridization Colony in situ hybridization |
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