| 幽门螺杆菌重组HpaA蛋白包涵体的切胶纯化分析 |
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| 引用本文： | 范贵荣,杨致邦,栗俊杰,郭丽媛,向瑜,韩飞.幽门螺杆菌重组HpaA蛋白包涵体的切胶纯化分析[J].中国微生态学杂志,2009,21(3). |
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| 作者姓名： | 范贵荣 杨致邦 栗俊杰 郭丽媛 向瑜 韩飞 |
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| 作者单位： | 重庆医科大学,基础医学院病原生物学教研室,神经科学研究中心,基础医学实验教学中心病原生物学与免疫实验室,重庆,400016 |
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| 基金项目： | 重庆市教委项目，重庆市科学技术委员会科技攻关项目 |
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| 摘 要： | 目的 探讨切胶纯化的最佳条件及纯化重组HpaA蛋白包涵体的可行性.方法 克隆并表达pQE30-hpaA-DH5α工程菌,获得重组HpaA蛋白包涵体,使用切胶纯化法进行纯化,得到可溶性的重组HpaA蛋白.SDS-PAGE电泳后使用不同浓度、不同pH的醋酸钠溶液以及不同的染色时间染色电泳蛋白条带,分析切胶纯化的最佳条件.Western blot鉴定重组HpaA蛋白的抗原性.将重组蛋白免疫BALB/c小鼠,双向免疫扩散法检测血清抗HpaA抗体,鉴定重组蛋白的免疫原性.结果 4 mol/L醋酸钠溶液、pH 13.0、作用1 h为切胶纯化的最佳条件.经切胶纯化法获得的重组HpaA蛋白体积为6 ml,浓度为0.2942 mg/ml,蛋白量为1.7652 mg,得率为77.1%,Western blot显示该蛋白具有良好的抗原性.小鼠免疫血清能与重组HpaA蛋白反应,双扩效价大于等于1∶ 16,具有良好的免疫原性.结论 切胶能够纯化重组HpaA蛋白包涵体,获得高纯度的可溶性重组HpaA蛋白,该蛋白具有良好的抗原性和免疫原性,可用于进一步的科学研究.
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| 关 键 词： | 幽门螺旋杆菌 粘附素 切胶纯化 |
Analysis for purification of recombinant HpaA protein of Helicobacter pylori from inclusion bodies in gel slices |
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| FAN Gui-rong,YANG Zhi-bang,LI Jun-jie,GUO Li-yuan,XIANG Yu,HAN Fei.Analysis for purification of recombinant HpaA protein of Helicobacter pylori from inclusion bodies in gel slices[J].Chinese Journal of Microecology,2009,21(3). |
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| Authors: | FAN Gui-rong YANG Zhi-bang LI Jun-jie GUO Li-yuan XIANG Yu HAN Fei |
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