| 检测博尔纳病病毒RNA的RACE技术的建立 |
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| 引用本文： | 钱钧,李小光,包丽丽,宋武琦,翟爱霞,陈小贝,李玉军,车洋,张凤民.检测博尔纳病病毒RNA的RACE技术的建立[J].中国微生态学杂志,2007,19(4):337-338,342. |
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| 作者姓名： | 钱钧 李小光 包丽丽 宋武琦 翟爱霞 陈小贝 李玉军 车洋 张凤民 |
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| 作者单位： | 哈尔滨医科大学,微生物学教研室,黑龙江,哈尔滨,150081 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金;黑龙江省教育厅海外学人科研(合作)基金 |
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| 摘 要： | 目的建立检测博尔纳病病毒(BDV)RNA的3′RACE(rapid amplification of cDNA ends)方法。方法根据已知的BDV p40基因序列设计上游引物sp1;提取BDV(H1766株)持续感染OL细胞的总RNA,用引物sp1和oligo dT进行3′RACE扩增,将PCR产物克隆到pGEM-T载体并转化到大肠埃希菌中,制备阳性菌落的目的质粒,进行序列测定和同源性比对;同时对检测BDV RNA的3′RACE方法的特异性和敏感性进行分析。结果建立了检测BDV RNA的3′RACE技术;所获得的BDV p40基因的3′末端扩增产物的核苷酸序列与已知BDV(H1766株)p40基因的核苷酸序列同源性为100%;本方法对BDV RNA(mRNA)具有特异性,但对BDV p40基因重组质粒无扩增结果;并且可以检测到0.04 ng以上含量的BDV感染细胞的总RNA。结论检测BDV RNA的3′RACE技术可以排除实验室污染造成的BDV基因扩增的假阳性,并可用于进一步分析BDV基因序列的特点以及评价BDV相关基因的表达情况。
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| 关 键 词： | 博尔纳病病毒 快速cDNA末端扩增 序列分析 |
| 文章编号： | 1005-376X（2007）04-0337-03 |
| 收稿时间： | 2007-02-10 |
| 修稿时间： | 2007-02-10 |
Establishment of 3'RACE method for detection of Borna disease virus RNA |
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| QIAN Jun,LI Xiao-guang,BAO Li-li,SONG Wu-qi,ZAI Ai-xia,CHEN Xiao-bei,LI Yu-jun,CHE Yang,ZHANG Feng-min.Establishment of 3'RACE method for detection of Borna disease virus RNA[J].Chinese Journal of Microecology,2007,19(4):337-338,342. |
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| Authors: | QIAN Jun LI Xiao-guang BAO Li-li SONG Wu-qi ZAI Ai-xia CHEN Xiao-bei LI Yu-jun CHE Yang ZHANG Feng-min |
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| Institution: | Department of Microbiology, Harbin Medical University, Harbin 150086, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Borna disease virus Rapid amplification of cDNA ends sequencing |
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